03-110

RIPAb+ Ago2 – durch RIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

ascites fluid, from mouse

• Synonym(e): Argonaute-2, Eukaryotic translation initiation factor 2C, Slicer protein, Piwi domain protein
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702

Eigenschaften

• biological source: mouse
• Quality Level: 100
• antibody form: ascites fluid
• clone: monoclonal
• species reactivity: human
• species reactivity (predicted by homology): bovine
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): RIP: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG1κ
• NCBI accession no.: NP_001158095.1

Beschreibung

General description

100 kDa

AGO2 (Argonautenprotein-2), auch als eukaryotischer Translationsinitiationsfaktor 2C (EIF2C2) bekannt, ist eine essenzielle Komponente der siRNA-gesteuerten RNA-Interferenz (RNAi)-Antwort. AGO2 ist eine Endonuklease, die für das Auseinanderwickeln des siRNA-Duplexes und die Anordnung von siRNA zu RNA-induced-silencing-complexes (RISC) erforderlich ist. AGO2 interagiert mit durch seine Piwi-Domäne mit DICER1. Es wird angenommen, dass diese Piwi-Domäne durch einen ähnlichen Mechanismus wie RNASE H eine RNA-Spaltungsaktivität bereitstellt. Die AGO2-Aktivität ist notwendig für die Embryonenentwicklung sowie für das RNA-vermittelte Gene-Silencing (RNAi).

Immunogen

An KLH-konjugiertes, synthetisches Peptid, das die Sequenz YSGAGPALAPPAPPPPIQG enthält.

Application

RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitation (microRNA):
Aus HeLa-Zellen (2 x 10⁷ Zelläquivalente je IP) präpariertes RIP-Lysat wurde einer Immunpräzipitation mit entweder 5 µl normalem Maus-IgG oder 5 µl Anti-Ago2-Antikörper und dem Magna RIP^® RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitationskit (Art.- Nr. 17-700) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation der Ago2-assoziierten microRNA wurde mit dem TaqMan microRNA-Assay, hsa-miR-23a, verifiziert. (Siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich auf das Protokoll Magna RIP (Art.- Nr. 17-700) oder EZ-Magna RIP (Art.- Nr. 17-701) für experimentelle Details.


Immunpräzipitation aus RIP-Lysat:
Daten einer repräsentativen Charge.
Ein RIP-Lysat aus HeLa-Zellen (2 x 10⁶ Zelläquivalente je IP) wurde einer Immunpräzipitation mit entweder 0,5 µl normalem Maus-IgG oder Anti-Ago2-Antikörper unterzogen. Die ausgefällten Proteine (Bahn 1: Maus-IgG, Bahn 2: Anti-Ago2) und das HeLa-Ganzzelllysat (Bahn 3) wurden mittels Elektrophorese aufgetrennt, auf Nitrocellulose übertragen und mit dem Anti-Ago2-Antikörper (Verdünnung 1:5.000) getestet.
Die Proteine wurden mit an HRP konjugiertem Anti-Maus-Sekundärantikörper der Ziege und Chemilumineszenz-Nachweis visualisiert.
(Siehe Abbildungen).

Dieses durch RIP validierte RIPAb+-Ago2-Antikörper- und Primer-Set enthält praktischerweise den Antikörper und die spezifischen Kontroll-PCR-Primer.

Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion

Forschungsunterkategorie
RNA-Metabolismus und Bindungsproteine

RNA-Bindungsprotein (RBP)

Biochem/physiol Actions

Erkennt Ago2.

Packaging

10 Assays je Set. Empfohlene Verwendung: ~5 μl Antikörper je RIP (abhängig vom biologischen Kontext).

Physical form

Anti-Ago2 (monoklonales Maus-IgG1κ). Ein Fläschchen mit 50 µl Aszitesflüssigkeit mit 0,05 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Maus-IgG. Ein Fläschchen mit 125 μg aufgereinigtem Maus-IgG in 125 µl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

RIP-Primer, FOS. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μM jedes spezifischen Primers für das humane FOS-Gen. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: GAG AGC TGG TAG TTA GTA GCA TGT TGA
REV: AAT TCC AAT AAT GAA CCC AAT AGA TTA GTT A

Preparation Note

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.
Handhabungsempfehlungen: Das Fläschchen nach Empfang und vor dem Abnehmen der Kappe zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Mikrozentrifugenröhrchen aliquotieren und bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen sind zu vermeiden, da sie das IgG beschädigen und die Produktleistung beeinträchtigen können

Analysis Note

RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitation:
Aus HeLa-Zellen (2 x 10⁷ Zelläquivalente je IP) präpariertes RIP-Lysat wurde einer Immunpräzipitation mit entweder 5 µl normalem Maus-IgG oder 5 µl Anti-Ago2-Antikörper und dem Magna RIP^® RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitationskit (Art.- Nr. 17-700) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation der Ago2-assoziierten RNA wurde mittels qPCR unter Verwendung von RIP-Primern, FOS, verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich auf das Protokoll Magna RIP (Art.- Nr. 17-700) oder EZ-Magna RIP (Art.- Nr. 17-701) für experimentelle Details.

Kontrolle
Einschließlich Maus-IgG-Antikörper als Negativkontrolle und für humanes FOS spezifische Kontrollprimer.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

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