Sacarosa en los refrescos

Determinación reflectométrica tras conversión enzimática.

Introducción

Los análisis químicos de los alimentos y bebidas se realizan para asegurar un consumo inocuo, así como la calidad y la integridad del producto. Como parte del control de calidad, los productores de refrescos deben controlar la concentración de azúcar (sacarosa) en sus productos finales y durante el proceso de fabricación. En esta nota de aplicación, describimos un método para determinar la sacarosa en los refrescos con el ensayo de sacarosa Reflectoquant^® y el reflectómetro RQflex^® 20.

Método experimental

La sacarosa es hidrolizada por la sacarosa fosforilasa en fructosa y glucosa-1-fosfato. Esta última es convertida en glucosa-6-fosfato por la fosfoglucomutasa. A su vez la glucosa-6-fosfato es oxidada por el NAD bajo el efecto catalítico de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa a gluconato-6-fosfato. En presencia de la diaforasa, el NADH formado en el proceso reduce una sal de tetrazolio a un formazán azul, que se determina mediante reflectometría.

Reactivos instrumentos y materiales

Kits de ensayo

• Método de ensayo de la sacarosa: reflectométrico con tiras reactivas y reactivo 0,25 a 2,50 g/l Reflectoquant^® (1.16141)

Instrumentos

• Reflectómetro RQflex^® 20 Reflectoquant^® (1.17246)*

*Esta nota de aplicación corresponde a RQflex^® 20 y todos los instrumentos descatalogados (RQflex^® 10, RQflex®^® plus)

Preparación de la muestra

Diluya la muestra en función del contenido de sacarosa previsto, por ejemplo, para una dilución 1:100, pipetee 0,5 ml de muestra en un matraz aforado de 50 ml y complete hasta la marca con agua destilada. Los resultados de la medición deben situarse preferiblemente en el centro del intervalo de medida. Puede que sea necesario repetir el paso de dilución con otra dilución.

Análisis instrumental

• Coloque 10 ml de agua destilada, 5 gotas de reactivo Sa-1 y 1 ml de la muestra correspondientemente diluida en el tubo de ensayo y agite.
• Pulse el botón de inicio del reflectómetro y, al mismo tiempo, sumerja la tira reactiva con ambas zonas de reacción en la muestra que se quiere medir (20 - 26 °C) durante unos 2 segundos.
• Deje que el exceso de líquido escurra por el borde largo de la tira en papel absorbente.
• Introduzca inmediatamente la tira reactiva en el adaptador para tiras.
• La tira reactiva se mide en el reflectómetro después de 300 segundos.

El valor de de la medida [g/l] se guarda automáticamente. (Consulte el manual de funcionamiento de RQflex^® y las instrucciones de uso del ensayo de sacarosa Reflectoquant^® ).

Medición en serie

Después de la primera medida, puede realizarse cualquier número de otras mediciones pulsando el botón de inicio. Sin embargo, esto requiere el uso de un cronómetro, ya que la función de cuenta atrás del reflectómetro solo está disponible para la primera medida. Las zonas de detección de la tira reactiva deben protegerse adecuadamente de la luz durante el tiempo de reacción.

Cálculo

Contenido de sacarosa [g/l] = valor de la medida [g/l] x factor de dilución

Resultados

Tabla 1. Valores de medición para cola (conc. nominal en cola según al fabricante: 10,6 g/100 ml. Resultado de HPLC: 10,5 g/100 ml)

	Volumen de cola	Factor de dilución	Contenido de sacarosa en dilución		Sacarosa en 100 ml de cola
	ml/100 ml		g/l	g/100 ml
Dilución 1	0,30	333	0,32	10,7
Dilución 2	0,50	200	0,55	11,0
Dilución 3	0,75	133	0,76	10,1
Dilución 4	1,00	100	1,02	10,2
Dilución 5	1,25	80	1,20	9,6
Dilución 6	1,50	67	1,60	10,7
Dilución 7	1,75	57	1,71	9,8
Dilución 8	2,00	50	2,16	10,8
Dilución 9	2,25	44	2,24	10,0
			Media	10,3

Tabla 2. Valores de medición de la naranjada (conc. nominal en la naranjada según al fabricante 9,4 g/100 ml)

	Volumen de naranjada	Factor de dilución	Contenido de sacarosa en dilución		Sacarosa en 100 ml de naranjada
	ml/100 ml		g/l	g/100 ml
Dilución 1	0,30	333	0,28	9,3
Dilución 2	0,50	200	0,45	9,0
Dilución 3	0,75	133	0,68	9,0
Dilución 4	1,00	100	0,85	8,5
Dilución 5	1,25	80	1,09	8,7
Dilución 6	1,50	67	1,43	9,6
Dilución 7	1,75	57	1,50	8,6
Dilución 8	2,00	50	1,91	9,6
Dilución 9	2,25	44	2,11	9,3
Dilución 10	2,50	40	2,24	9,0
			Media	9,1