12209136001
Roche
Análisis de longitud de los telómeros TeloTAGGG™
sufficient for ≤50 reactions, kit of 1 (15 components), suitable for cell culture
Sinónimos:
telómero
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About This Item
UNSPSC Code:
41105500
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usage
sufficient for ≤50 reactions
Quality Level
packaging
kit of 1 (15 components)
manufacturer/tradename
Roche
technique(s)
cell culture | mammalian: suitable
storage temp.
−20°C
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General description
El kit utiliza análisis mediante la técnica Southern de los fragmentos de restricción terminales (TRF) que se obtienen por la digestión del ADN genómico utilizando enzimas de restricción de corte frecuente.
Paso 1: Digestión del ADN genómico
El ADN genómico purificado es digerido por una mezcla optimizada de enzimas de restricción de corte frecuente. Las enzimas se han seleccionado de tal manera que no se corte el ADN telomérico ni el ADN subtelomérico. Esto se debe a las especiales características de secuencia de las repeticiones. El ADN no telomérico es digerido hasta fragmentos de bajo peso molecular.
Paso 2: Electroforesis en gel y técnica de Southern
Después de la digestión del ADN, se separan los fragmentos de ADN mediante electroforesis en gel y luego se transfieren a una membrana de nailon mediante la técnica de Southern.
Paso 3: Hibridación y detección por quimioluminiscencia
Los fragmentos de ADN transferidos se híbridan a una sonda marcada con digoxigenina (DIG) que es específica para las repeticiones teloméricas, luego se incuban con un anticuerpo específico de la DIG acoplado covalentemente a la fosfatasa alcalina. Por último, se visualiza la sonda de telómero inmovilizada mediante un sustrato quimioluminiscente muy sensible de la fosfatasa alcalina, el CDP-Star. La longitud promedio del TRF puede determinarse comparando las señales con un patrón de peso molecular.
Paso 1: Digestión del ADN genómico
El ADN genómico purificado es digerido por una mezcla optimizada de enzimas de restricción de corte frecuente. Las enzimas se han seleccionado de tal manera que no se corte el ADN telomérico ni el ADN subtelomérico. Esto se debe a las especiales características de secuencia de las repeticiones. El ADN no telomérico es digerido hasta fragmentos de bajo peso molecular.
Paso 2: Electroforesis en gel y técnica de Southern
Después de la digestión del ADN, se separan los fragmentos de ADN mediante electroforesis en gel y luego se transfieren a una membrana de nailon mediante la técnica de Southern.
Paso 3: Hibridación y detección por quimioluminiscencia
Los fragmentos de ADN transferidos se híbridan a una sonda marcada con digoxigenina (DIG) que es específica para las repeticiones teloméricas, luego se incuban con un anticuerpo específico de la DIG acoplado covalentemente a la fosfatasa alcalina. Por último, se visualiza la sonda de telómero inmovilizada mediante un sustrato quimioluminiscente muy sensible de la fosfatasa alcalina, el CDP-Star. La longitud promedio del TRF puede determinarse comparando las señales con un patrón de peso molecular.
Los telómeros, las estructuras ADN-proteína especializadas situadas al final de los cromosomas eucariotas, constan de pequeñas secuencias de ADN repetidas en tándem. Se han identificado numerosas secuencias de telómeros que exhiben muy pocas variaciones de secuencia, incluso entre organismos filogenéticamente divergentes como Tetrahymena (secuencia: TTGGGG) y el ser humano (secuencia: TTAGGG).
Dado que la ADN polimerasa es incapaz de replicar los extremos finales del ADN lineal, se sugirió que los cromosomas se van acortando progresivamente con cada ciclo de replicación (lo que se ha denominado el «problema al final de la replicación»). Este fenómeno, que se ha demostrado in vitro e in vivo, parece estar ligado a la limitada capacidad proliferativa de las células somáticas normales («reloj mitótico»). Dado que las células de las líneas germinales, las células madre y las células tumorales exhiben una vida útil prolongada o incluso infinita, se sugirió que esas células debían poseer un mecanismo particular para mantener la longitud de los telómeros.
El mantenimiento de la longitud estable de los telómeros se asocia con la activación de la telomerasa. Esta enzima es una ribonucleoproteína que compensa la pérdida del ADN telomérico añadiendo secuencias repetidas a los extremos del cromosoma mediante la utilización de su componente de ARN intrínseco como molde para la síntesis de ADN.
Los telómeros desempeñan un papel esencial en el mantenimiento estable de los cromosomas eucariotas dentro de una célula al unirse específicamente a proteínas estructurales. Esas proteínas tapan los extremos de los cromosomas lineales impidiendo así la degradación nucleolítica, la fusión de extremo a extremo, la recombinación irregular y otros eventos que normalmente son letales para una célula.
El análisis de la longitud de los telómeros en muestras de células mononucleares de sangre periférica humana para investigación revela que la longitud del telómero disminuye al aumentar la edad del donante, lo que refleja la historia replicativa de esas células. En algunas enfermedades (por ejemplo el síndrome de Down, la ataxia telangiectasia y la infección por VIH), se ha descrito una pérdida acelerada de telómeros, lo que sugiere que la reducción de la longitud de los telómeros puede estar relacionada con la disfunción inmunitaria asociada con esas enfermedades. Este kit está indicado para aumentar el conocimiento científico sobre esas relaciones.
Tiempo de ensayo: Aproximadamente 18 horas
Material de muestra: Cultivos celulares y otras muestras biológicas
Análisis quimioluminiscente no radiactivo para determinar la longitud de los telómeros.
Dado que la ADN polimerasa es incapaz de replicar los extremos finales del ADN lineal, se sugirió que los cromosomas se van acortando progresivamente con cada ciclo de replicación (lo que se ha denominado el «problema al final de la replicación»). Este fenómeno, que se ha demostrado in vitro e in vivo, parece estar ligado a la limitada capacidad proliferativa de las células somáticas normales («reloj mitótico»). Dado que las células de las líneas germinales, las células madre y las células tumorales exhiben una vida útil prolongada o incluso infinita, se sugirió que esas células debían poseer un mecanismo particular para mantener la longitud de los telómeros.
El mantenimiento de la longitud estable de los telómeros se asocia con la activación de la telomerasa. Esta enzima es una ribonucleoproteína que compensa la pérdida del ADN telomérico añadiendo secuencias repetidas a los extremos del cromosoma mediante la utilización de su componente de ARN intrínseco como molde para la síntesis de ADN.
Los telómeros desempeñan un papel esencial en el mantenimiento estable de los cromosomas eucariotas dentro de una célula al unirse específicamente a proteínas estructurales. Esas proteínas tapan los extremos de los cromosomas lineales impidiendo así la degradación nucleolítica, la fusión de extremo a extremo, la recombinación irregular y otros eventos que normalmente son letales para una célula.
El análisis de la longitud de los telómeros en muestras de células mononucleares de sangre periférica humana para investigación revela que la longitud del telómero disminuye al aumentar la edad del donante, lo que refleja la historia replicativa de esas células. En algunas enfermedades (por ejemplo el síndrome de Down, la ataxia telangiectasia y la infección por VIH), se ha descrito una pérdida acelerada de telómeros, lo que sugiere que la reducción de la longitud de los telómeros puede estar relacionada con la disfunción inmunitaria asociada con esas enfermedades. Este kit está indicado para aumentar el conocimiento científico sobre esas relaciones.
Tiempo de ensayo: Aproximadamente 18 horas
Material de muestra: Cultivos celulares y otras muestras biológicas
Análisis quimioluminiscente no radiactivo para determinar la longitud de los telómeros.
Application
El análisis de longitud de los telómeros TeloTAGGG™ está diseñado para su uso en las siguientes aplicaciones de investigación en ciencias de la vida:
Features and Benefits
- Seguridad: No radiactiva
- Flexible: Detecta telómeros de una variedad de organismos, entre ellos el ser humano y el ratón.
Packaging
1 kit que contiene 15 componentes.
Sequence
La secuencia y la longitud de la sonda son confidenciales. El peso molecular (MW) de la DIG marcada del kit es una mezcla del MW III y el MW VII de la DIG
Preparation Note
Concentración de trabajo: La concentración de trabajo del conjugado depende de la aplicación y del sustrato
Las siguientes concentraciones deben considerarse orientativas:
Disolución de trabajo: tampón TAE
Tris-acetato 0,04 M, EDTA 0,001 M, pH 8,0
Disolución de HCl
HCl 0,25 M
Para una mancha de 200 cm2 se necesitan unos 250 ml de disolución.
Disolución de desnaturalización
NaOH 0,5 M, NaCl 1,5 M
Para una mancha de 200 cm2 se necesitan unos 500 ml de disolución.
Disolución neutralizante
Tris-HCl 0,5 M, NaCl 3 M, pH 7,5
Para una mancha de 200 cm2 se necesitan unos 500 ml de disolución.
20x SSC
NaCl 3 M, citrato de sodio 0,3 M, pH 7,0
2x SSC
Diluir 20x SSC (Disolución 5) 1:10 Con agua redestilada, esterilizada en autoclave.
Gránulos de DIG Easy Hyb
Reconstituya los gránulos (botella 8) con 64 ml de agua redestilada y esterilizada en autoclave e incumbe a 37 °C hasta la reconstitución completa. Prepare la disolución varias horas antes de su uso.
Tampón de lavado Stringent I
2x SSC, SDS al 0,1%
Tampón de lavado Stringent II
0,2x SSC, SDS al 0,1%
Tampón de lavado, 1x
Diluya un volumen apropiado del tampón de lavado, 10x (frasco 10) 1:10 con agua redestilada y esterilizada en autoclave.
Disolución de bloqueo, 1x
Diluya un volumen apropiado del tampón de bloqueo, 10x (frasco 12) 1:10 con tampón de ácido maleico, 1x (disolución 12).
Tampón de ácido maleico, 1×
Diluya un volumen apropiado del tampón de ácido maleico, 10x (frasco 11) 1:10 con agua redestilada y esterilizada en autoclave.
Anti-DIG-AP, disolución de trabajo
Para reducir el fondo por anticuerpos agregados, centrífugue el vial durante 5 minutos a 13 000 rpm antes de su uso.
Diluya un volumen apropiado de Anti-DIG-AP (frasco 13) con disolución de bloqueo, 1x (disolución 11) a una concentración de 75 mU/ml (1:10 000).
Tampón de detección, 1x
Diluya un volumen apropiado del tampón de detección, 10x (frasco 14) 1:10 con agua redestilada y esterilizada en autoclave.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): Tampón TAE:
Estable entre 15 y 25 °C
Disolución de HCl
Estable entre 15 y 25 °C
Disolución de desnaturalización
Estable entre 15 y 25 °C
Disolución de neutralización
Estable entre 15 y 25 °C
20x SSC
Estable entre 15 y 25 °C
2x SSC
Estable entre 15 y 25 °C
DIG Easy Hyb
Estable entre 15 y 25 °C durante 3 meses
Tampón de lavado Stringent I
Estable entre 15 y 25 °C
Tampón de lavado Stringent II
Estable entre 15 y 25 °C
Tampón de lavado, 1x
Estable entre 15 y 25 °C
Disolución de bloqueo, 1x
Preparar inmediatamente antes de usarla. No almacenar
Tampón de ácido maleico, 1×
Estable entre 15 y 25 °C
Anti-DIG-AP, Disolución de trabajo
Preparar inmediatamente antes de usarla. No almacenar
Tampón de detección, 1x
Estable entre 15 y 25 °C
Las siguientes concentraciones deben considerarse orientativas:
- Inmunoanálisis por puntos: 100 ng/ml
- ELISA: 100 ng/ml
- Western blot: 100 ng/ml
Disolución de trabajo: tampón TAE
Tris-acetato 0,04 M, EDTA 0,001 M, pH 8,0
Disolución de HCl
HCl 0,25 M
Para una mancha de 200 cm2 se necesitan unos 250 ml de disolución.
Disolución de desnaturalización
NaOH 0,5 M, NaCl 1,5 M
Para una mancha de 200 cm2 se necesitan unos 500 ml de disolución.
Disolución neutralizante
Tris-HCl 0,5 M, NaCl 3 M, pH 7,5
Para una mancha de 200 cm2 se necesitan unos 500 ml de disolución.
20x SSC
NaCl 3 M, citrato de sodio 0,3 M, pH 7,0
2x SSC
Diluir 20x SSC (Disolución 5) 1:10 Con agua redestilada, esterilizada en autoclave.
Gránulos de DIG Easy Hyb
Reconstituya los gránulos (botella 8) con 64 ml de agua redestilada y esterilizada en autoclave e incumbe a 37 °C hasta la reconstitución completa. Prepare la disolución varias horas antes de su uso.
Tampón de lavado Stringent I
2x SSC, SDS al 0,1%
Tampón de lavado Stringent II
0,2x SSC, SDS al 0,1%
Tampón de lavado, 1x
Diluya un volumen apropiado del tampón de lavado, 10x (frasco 10) 1:10 con agua redestilada y esterilizada en autoclave.
Disolución de bloqueo, 1x
Diluya un volumen apropiado del tampón de bloqueo, 10x (frasco 12) 1:10 con tampón de ácido maleico, 1x (disolución 12).
Tampón de ácido maleico, 1×
Diluya un volumen apropiado del tampón de ácido maleico, 10x (frasco 11) 1:10 con agua redestilada y esterilizada en autoclave.
Anti-DIG-AP, disolución de trabajo
Para reducir el fondo por anticuerpos agregados, centrífugue el vial durante 5 minutos a 13 000 rpm antes de su uso.
Diluya un volumen apropiado de Anti-DIG-AP (frasco 13) con disolución de bloqueo, 1x (disolución 11) a una concentración de 75 mU/ml (1:10 000).
Tampón de detección, 1x
Diluya un volumen apropiado del tampón de detección, 10x (frasco 14) 1:10 con agua redestilada y esterilizada en autoclave.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): Tampón TAE:
Estable entre 15 y 25 °C
Disolución de HCl
Estable entre 15 y 25 °C
Disolución de desnaturalización
Estable entre 15 y 25 °C
Disolución de neutralización
Estable entre 15 y 25 °C
20x SSC
Estable entre 15 y 25 °C
2x SSC
Estable entre 15 y 25 °C
DIG Easy Hyb
Estable entre 15 y 25 °C durante 3 meses
Tampón de lavado Stringent I
Estable entre 15 y 25 °C
Tampón de lavado Stringent II
Estable entre 15 y 25 °C
Tampón de lavado, 1x
Estable entre 15 y 25 °C
Disolución de bloqueo, 1x
Preparar inmediatamente antes de usarla. No almacenar
Tampón de ácido maleico, 1×
Estable entre 15 y 25 °C
Anti-DIG-AP, Disolución de trabajo
Preparar inmediatamente antes de usarla. No almacenar
Tampón de detección, 1x
Estable entre 15 y 25 °C
Other Notes
Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.
Legal Information
Fabricado bajo licencia de Geron Corporation.
TeloTAGGG is a trademark of Roche
Solo componentes del kit
Referencia del producto
Descripción
- Hinf I (30μl) 40U/μl
- Rsa I (30μl) 40U/μl
- Digestion Buffer 10x concentrated
- Water, nuclease-free
- Control DNA 150μl
- DIG Molecular Weight Marker 40 μl
- Loading Buffer 5x concentrated
- DIG Easy Hyb Granules
- Telomerase Probe
- Washing Buffer 10x concentrated
- Maleic Acid Buffer 10x concentrated
- Blocking Buffer 10x concentrated
- Anti-DIG-AP antibody
- Detection Buffer 10x concentrated
- Substrate Solution (CDP-Star) ready-to-use
Ver todo (15)
signalword
Warning
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Skin Irrit. 2
Storage Class
12 - Non Combustible Liquids
wgk_germany
WGK 3
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
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Telomeres are the protective arrays of tandem TTAGGG sequence and associated proteins at the termini of chromosomes. Telomeres shorten at each cell division due to the end-replication problem and are maintained above a critical threshold in malignant cancer cells to
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