使用 Supel™ Carbon LC 色譜柱進行核苷的超高效液相色譜分析：與競爭對手的性能比較

William L. Maule III, Clint Corman, Michael Ye, Cory Muraco, Curtis Frantz

Merck Bellefonte, PA

引言

核苷是重要的小分子類別，是核酸的構成塊。此外，核苷作為抗逆轉錄病毒藥物的活性藥品成分 (API) 以及某些疾病的生物標記，也引起了人們的興趣。然而，由於這些被分析物之間的結構相似性，開發一種分析方法來表征一系列這些化合物可能是極具挑戰性的。本應用展示了使用 Supel^TM Carbon LC 色譜柱來解析 12 種核苷類化合物。

節概述

• 核苷分析的實驗條件
• 結論

圖 1. 本研究中使用的化合物的化學結構。

核苷分析的實驗條件

表 1. 分析核苷的色譜條件。

Supel™ Carbon LC, 10 cm x 2.1 mm I.D.、2.7 µm
	Competitor T, 10 cm x 2.1 mm I.D.、3.0 µm
偵測	紫外線；260 nm
緩衝液	5 mM 甲酸銨水溶液，pH 調至 5.3
移動相	[A] 5 mM 甲酸銨，pH 值調至 5.3; [B] 乙腈
%A	%B
	0	90	10
	40	40	60
	50	90	10
測試混合物	核苷測試混合物，不同濃度，1% 甲酸鈉。
注射量	核苷測試混合物，不同濃度，1%甲酸鈉。10 µL
流速	0.25 mL/min
溫度	色譜柱：55 °C

表 2. 研究中使用的測試混合成分。

	測試組合 分析物/濃度
1	胞苷 (50 µg/mL)
2	肌苷 (25 µg/mL)
3<	肌苷 (25 µg/mL)
4	1-甲基腺苷 (25 µg/mL)
5	5-甲基胞苷（100 µg/mL)
6	2'-O-甲基胞苷（20 µg/mL)
7	3-Methylcytidine methosulfate (100 µg/mL)
8	7-Methylguanosine (25 µg/mL)
9	5-Methyluridine (50 µg/mL)
10	ß-假尿苷 (25 µg/mL)
11	2-硫胞苷二水合物 (10 µg/mL)
12	烏啶 (25 µg/mL)

效能結果與比較

圖 3. 在 Supel™ 碳 LC 上分析 12 種核苷。

表 3. 核苷在 Supel™ Carbon LC 上的洗脱順序。

峰值	化合物	保留時間 (min)
1	ß-假尿苷 (25 μg/mL)	5。346
2	3-甲基胞嘧啶甲磺酸鹽 (100 μg/mL)	5.791
3	胞苷 (50 µg/mL)	5.982
4	尿苷 (25 µg/mL)	7。328
5	2'-O-甲基胞苷（20 µg/mL)	8.283
6	5-甲基胞苷（100 µg/mL)	9.307
7	1-甲基腺苷 (25 µg/mL)	9.530
8	5-甲基胞苷（100 µg/mL)	11.641
9	肌苷（25 µg/mL)	12.130
10	7-甲基鸟苷 (25 µg/mL)	12.725
11	二水硫胞苷 (10 µg/mL)	13.571
12	鸟苷（25 µg/mL）	14.203

圖 4. 在競爭碳柱上分析十二種核苷。

表 4. 核苷在競爭碳柱上的洗脱順序。

峰值	化合物	重置。時間 (min)
1	ß-假尿苷 (25 µg/mL)	5。242
2	胞苷 (50 µg/mL)	6.258
3	尿苷 (25 µg/mL)	6。804
4	2'-O-甲基胞苷（20 µg/mL)	8.652
5	5-甲基胞苷（100 µg/mL)	9.705
6	5-甲基尿苷 (50 µg/mL)	10.971
7	3-甲基胞嘧啶甲磺酸鹽 (100 µg/mL)	11.616
8	肌苷 (25 µg/mL)	12.199
9	二水硫胞苷 (10 µg/mL)	14.040
10	1-甲基腺苷 (25 µg/mL)
11	鸟苷 (25 µg/mL)	17.366
12	7-甲基鸟苷（25 µg/mL）	N/A

結論

本應用展示了使用 Supel^TM Carbon LC 色譜柱在 15 分鐘內分辨出 12 種核苷的能力。Supel^TM Carbon LC 色譜柱在發生兩次共溶的情況下，表現也優於競爭對手的色譜柱，是核苷生物標誌物鑑定和定量的絕佳選擇。