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生物源
rabbit
品質等級
抗體表格
purified antibody
抗體產品種類
primary antibodies
無性繁殖
SC56-2, monoclonal
物種活性
human, E. coli
物種活性(以同源性預測)
all
技術
dot blot: suitable
western blot: suitable
同型
IgG
運輸包裝
wet ice
目標翻譯後修改
phosphorylation (N3-pHis)
一般說明
磷酸化在调节蛋白质活性和细胞中各种细胞信号事件中起重要作用。受磷酸组氨酸(pHis)检测工具的限制,大多数研究集中在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸磷酸化上。组氨酸磷酸化可发生在咪唑环的N1(1-pHis)或N3(3-pHis)处。含有1-pHis和3-pHis的稳定的磷酸化三唑基丙氨酸类似物(1-pTza和3-pTza)的肽的开发允许产生用于研究信号事件中组氨酸N1和N3磷酸化的抗体。越来越多的证据表明His激酶与癌症和肿瘤转移有关,第一个鉴定出的转移抑制基因是两种已知的哺乳动物His激酶Nm23-H1(也称为NME1、嘧啶核苷二磷酸激酶或NDPK-A)之一。Nm23-H1/Nme1和密切相关的Nm23-H2(Nme2/NDPK-B)通过1-pHis酶中间体催化磷酸盐从ATP转移到核苷二磷酸(NDP)上。Nm23-H1/-H2也具有His激酶活性,可将磷酸盐从活性位点pHis转移到目标蛋白中的His上。诸如磷酸甘油酸变位酶(PGAM)、琥珀酰辅酶A合酶(SCS)和ATP柠檬酸裂合酶(ACL)之类的代谢酶也使用pHis作为酶中间体。与NME1/2不同,PGAM使用3-pHis作为酶中间体。除真核生物外,组氨酸磷酸化在趋化性涉及的细菌“两组分”信号传导途径中也有充分的文献记载,尽管磷酸盐从受体/传感器蛋白中形成的pHis转移到受体反应调节蛋白的Asp残基上,并且受体/传感器蛋白本质上起天冬氨酸激酶的作用。
特異性
目标修饰不是物种特异性的。
选择性检测咪唑环N3位点组氨酸磷酸化的蛋白(3-pHis),而非1-pHis。
應用
抗N3-磷酸组氨酸(3-pHis)抗体(克隆SC56-2)是一种异构体特异性单克隆抗体,可特异性检测N3位点磷酸化的组氨酸。该纯化的mAb得到了已发布数据的支持,该数据证明了其在蛋白质印迹和斑点印迹应用中的性能。
斑点印迹分析:一个代表性批次检测到含有3-pTza磷酸组氨酸类似物的肽,但未检测到仅含有磷酸化酪氨酸的肽。克隆SC56-2对基于NM23-H1/NME1 3-pHis118和PGAM 3-pHis11序列的3-pTza肽反应性最高,对基于ACLY 3-pHis760、组蛋白H4 3-pHis18或Kca3.1 3-pHis358序列的3-pTza肽反应性最低,而对基于GNB1 3-pHis266的3-pTza肽反应性最低(Fuhs, S.R.,et al.(2015).Cell.162(1):198-210)。
蛋白质印迹分析:使用克隆SC56-2杂交瘤培养物上清液对来自转化大肠杆菌的裂解物中外源表达的人PGAM GST融合蛋白的热敏组氨酸N3-磷酸化(3-pHis)进行蛋白质印迹分析(Fuhs, S.R.,et al.(2015).Cell.162(1):198-210)。
注意: 在检测磷酸组氨酸之前,请勿加热样品。组氨酸磷酸化对热和酸不稳定。为生成特异性试验的阴性对照,可将等分样品在95ºC下加热10-15分钟,以逆转组氨酸磷酸化。或者,可以将等分试样样品在酸化pH值和37ºC下孵育15分钟,以减少组氨酸的磷酸化。孵育前用25 µL 1 M HCl酸化各100 µL样品,然后在磷酸组氨酸检测前用25 µL 1 M NaOH中和。
蛋白质印迹分析:使用克隆SC56-2杂交瘤培养物上清液对来自转化大肠杆菌的裂解物中外源表达的人PGAM GST融合蛋白的热敏组氨酸N3-磷酸化(3-pHis)进行蛋白质印迹分析(Fuhs, S.R.,et al.(2015).Cell.162(1):198-210)。
注意: 在检测磷酸组氨酸之前,请勿加热样品。组氨酸磷酸化对热和酸不稳定。为生成特异性试验的阴性对照,可将等分样品在95ºC下加热10-15分钟,以逆转组氨酸磷酸化。或者,可以将等分试样样品在酸化pH值和37ºC下孵育15分钟,以减少组氨酸的磷酸化。孵育前用25 µL 1 M HCl酸化各100 µL样品,然后在磷酸组氨酸检测前用25 µL 1 M NaOH中和。
品質
通过PGAM催化的2,3-DPG降解反应的蛋白质印迹法进行评估。
蛋白质印迹分析:0.52 µg/mL该抗体在5 µg等分PGAM催化的2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)降解反应中检测到重组人磷酸甘油酸变位酶(PGAM)和N3-磷酸组氨酸(3-pHis)。
蛋白质印迹分析:0.52 µg/mL该抗体在5 µg等分PGAM催化的2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)降解反应中检测到重组人磷酸甘油酸变位酶(PGAM)和N3-磷酸组氨酸(3-pHis)。
標靶描述
根据组氨酸磷酸化蛋白而变化。
外觀
形式:纯化
其他說明
浓度:请参考特定批次的数据表。
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儲存類別代碼
12 - Non Combustible Liquids
水污染物質分類(WGK)
WGK 1
閃點(°F)
Not applicable
閃點(°C)
Not applicable
分析證明 (COA)
輸入產品批次/批號來搜索 分析證明 (COA)。在產品’s標籤上找到批次和批號,寫有 ‘Lot’或‘Batch’.。
Frontiers in microbiology, 13, 820089-820089 (2022-05-14)
In Streptococcus mutans, we find that the histidine kinase WalK possesses the longest C-terminal tail (CTT) among all 14 TCSs, and this tail plays a key role in the interaction of WalK with its response regulator WalR. We demonstrate that
LHPP suppresses gastric cancer progression via the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway.
Journal of Cancer, 13, 3584-3592 (2022)
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.), 2077, 209-224 (2019-11-11)
Immunofluorescence (IF) takes advantage of biological and physical mechanisms to identify proteins in cell or tissue samples, exploiting the specificity of antibodies and stimulated fluorescence light emission. Here, we describe an immunofluorescence staining method for the identification of histidine phosphorylated
Oncogene, 42(6), 449-460 (2022-12-14)
Current clinical therapies targeting receptor tyrosine kinases including focal adhesion kinase (FAK) have had limited or no effect on esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). Unlike esophageal adenocarcinomas, ESCC acquire glucose in excess of their anabolic need. We recently reported that
Cellular and molecular gastroenterology and hepatology, 8(1), 37-60 (2019-03-06)
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