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一般說明
Sigma′s GenElute哺乳动物总RNA小量制备试剂盒提供了一种从哺乳动物细胞和组织中分离总RNA的简单便捷方法。提供了细胞，组织和纤维组织的方案。这些方案的细胞裂解和破坏条件不同。一旦RNA结合到GenElute结合柱上，所有起始物料的纯化程序都是相同的。对于纤维组织，试剂盒必须与蛋白酶K（目录号P4850）一起使用，以确保有效的细胞破碎。 该试剂盒结合了基于二氧化硅和微针形式的优点，无需使用氯化铯梯度、酒精沉淀和有害的有机化合物，如苯酚和氯仿。细胞或组织在含有硫氰酸胍的缓冲液中裂解和匀浆，以确保
大分子彻底变性和RNase失活。当裂解物在微量离心管中通过二氧化硅膜旋转时，乙醇的加入会导致RNA结合。 洗涤去除污染物后，在50-100 μL洗脱液中洗脱RNA。 在不到30分钟的时间内可以分离出多达150 μg的总RNA。
如果必须消除所有痕量的DNA污染，建议用DNase I进一步处理。当RNA与GenElute结合柱结合时，可使用柱上DNase I消化装置（DNASE10和DNASE70）进行DNase I消化。或者，为了更严格地去除污染的DNA，可以用扩增级DNase I（AMPD1）处理最终的RNA制剂。
大分子彻底变性和RNase失活。当裂解物在微量离心管中通过二氧化硅膜旋转时，乙醇的加入会导致RNA结合。 洗涤去除污染物后，在50-100 μL洗脱液中洗脱RNA。 在不到30分钟的时间内可以分离出多达150 μg的总RNA。
如果必须消除所有痕量的DNA污染，建议用DNase I进一步处理。当RNA与GenElute结合柱结合时，可使用柱上DNase I消化装置（DNASE10和DNASE70）进行DNase I消化。或者，为了更严格地去除污染的DNA，可以用扩增级DNase I（AMPD1）处理最终的RNA制剂。
我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。相比使用苯酚和氯仿的标准DNA提取方法，本品是一种本安型化学制剂。
應用
GenElute™哺乳动物总RNA小量试剂盒已用于从细胞和组织中提取总RNA。
纯化的RNA可用于逆转录和PCR，标记和微阵列分析以及其他常见应用。请注意，在该试剂盒使用的条件下，长度短于200个核苷酸的RNA（例如tRNA，5S rRNA和5.8S rRNA）无法有效回收。
特點和優勢
- 从每个制备物中纯化多达107个细胞或40 mg组织中的总RNA
- 每次制备最多可产生150 μg纯的浓缩总RNA
- 从少至100个细胞中回收RNA
- 简单高效-30分钟内制备12-18次
- 比重力流阴离子交换方法快
- 没有与树脂和磁浆相关的繁琐步骤
- 每个试剂盒的纯化比领先供应商多40%
其他說明
GenElute™哺乳动物总RNA纯化试剂盒将硅胶膜技术与方便的旋转柱形式相结合，以快速结合，洗涤和洗脱的方法制备高质量的总RNA。
有关其他信息，请参阅 www.sigma-aldrich.com/totalrna。
原則
将样品裂解并在硫氰酸胍和2-巯基乙醇中匀浆以释放RNA并灭活RNase。裂解物通过过滤柱旋转以去除细胞碎片和剪切DNA。然后将滤液加到高容量硅胶柱上以结合总RNA，然后洗涤和洗脱。每个制备液在100 μl水中最多可回收150 μg总RNA。纯化的RNA准备用于印迹杂交（图1），RT-PCR（图2）和其他常见应用。
法律資訊
GenElute is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC
訊號詞
Danger
危險分類
Acute Tox. 2 Dermal - Acute Tox. 3 Inhalation - Acute Tox. 3 Oral - Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - Eye Dam. 1 - Repr. 2 - Skin Corr. 1C - Skin Sens. 1 - STOT RE 2 Oral
標靶器官
Liver,Heart
安全危害
儲存類別代碼
6.1A - Combustible acute toxic Cat. 1 and 2 / very toxic hazardous materials
閃點（°F）
154.4 °F
閃點（°C）
68 °C
Directed differentiation of human induced pluripotent stem cells into functional cholangiocyte-like cells
Fotios sampaziotis
Nature Protocols, 12(4), 814-827 (2017)
Beth Malcomson et al.
Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 113(26), E3725-E3734 (2016-06-12)
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McCallum K
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Gradient Fractionated Separation of Chondrogenically Committed Cells Derived from Human Embryonic Stem Cells
Natasja Leth Joergensen
BioResearch Open Access, 4(1) (2015)
实验方案
Instructions for purifying viral RNA using GenElute™ Mammalian Total RNA Purification Kits.
Northern和Southern印迹简介：两种将大分子转移到膜支持物的常用方法。该文章还提供了Northern印迹和Southern印迹的实验方案。
Learn Northern and Southern blotting basics, with protocols and applications for macromolecule transfer to membrane supports.
我们的科学家团队拥有各种研究领域经验，包括生命科学、材料科学、化学合成、色谱、分析及许多其他领域.
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