Przejdź do zawartości
Merck
Strona głównaOczyszczanie białekZestawy do deglikozylacji

Zestawy do deglikozylacji

Glikozylacja często prowadzi do problemów w późniejszych procedurach analizy białek. Glikopeptydy zazwyczaj nie ulegają łatwo jonizacji podczas analizy MS, co prowadzi do niewystarczających danych spektralnych. Co więcej, trawienie proteolityczne natywnej glikoproteiny jest często niekompletne z powodu przeszkód sterycznych ze strony oligosacharydów. Preferowane jest usunięcie grup węglowodanowych z glikoproteiny przed identyfikacją białka. Porównaj cechy i zalety naszych różnych zestawów do deglikozylacji, aby znaleźć odpowiedni zestaw do swojego zastosowania.

Czytaj więcej o

GlycoProfile™ I Enzymatic In-gel N-Deglycosylation Kit
GlycoProfile™ II Enzymatic In-solution N-Deglycosylation Kit
Zestaw do enzymatycznej deglikozylacji białek
Zestaw do natywnej deglikozylacji białek
PNGase Fast

GlycoProfile™ I Enzymatic In-gel N-Deglycosylation Kit

Nasz GlycoProfile™ I Enzymatic In-gel N-Deglycosylation Kit został zoptymalizowany w celu zapewnienia wygodnej i powtarzalnej metody N-deglikozylacji i tryptycznego trawienia próbek białek w plastrach żelu poliakrylamidowego 1D lub 2D do późniejszej analizy MS lub HPLC. Procedura jest odpowiednia dla żeli barwionych błękitem Coomassie™ i koloidalnym Coomassie i może być stosowana z żelami barwionymi srebrem i odbarwianymi przy użyciu naszego zestawu ProteoSilver™ Plus (nr produktu  PROTSIL2). GlycoProfile™ Enzymatic In-gel N-Deglycosylation Kit zawiera enzymy i odczynniki niezbędne do N-linkowej deglikozylacji i trawienia tryptycznego. Próbki można następnie odsolić i zatężyć do analizy metodą MALDI-TOF lub elektrorozpylania MS.

Features and Benefits

  • Zawiera wszystkie składniki do deglikozylacji w żelu i trypsynizacji próbek białek-.w wygodny sposób przygotowuje zdeglikozylowane próbki białek do analizy za pomocą MS lub HPLC
  • Używa PNGazy F do enzymatycznego usuwania N-łączonych glikanów - białka pozostają nienaruszone, w przeciwieństwie do stosowania chemicznej deglikozylacji, która może degradować białko<
  • Zawiera PNGazę F i Trypsynę klasy Proteomics - wysoce oczyszczone enzymy nie posiadają niepożądanych aktywności ani dodatków komplikujących analizę
  • PNGaza F jest dostarczana w postaci liofilizowanej z buforu o niskiej zawartości soli - umożliwia rekonstytucję enzymu do dowolnego wymaganego stężenia
  • Działa w roztworze lub z plastrami żelu - umożliwia wybór metody
Składniki zestawu do enzymatycznej N-deglikozylacji w żelu GlycoProfile™ I, w tym PNGaza F i trypsyna.

Rysunek 1.Składniki zestawu do deglikozylacji w żelu GlycoProfile™ I.

Proces deglikozylacji w żelu

Początek procesu deglikozylacji w żelu rozpoczyna się od wycięcia interesującego białka, a następnie umieszczenia wycinka żelu w silikonowanej rurce.

Krok 1

  1. Wyodrębnić interesujące białko
  2. Umieścić wycinek żelu w silikonowanej probówce
.
    Druga część procesu deglikozylacji w żelu, rozpoczynająca się od odbarwienia wycinka żelu, usunięcia roztworu odbarwiającego i wysuszenia żelu w koncentratorze próżniowym.
    1. Odbarwić plasterek żelu
    2. Usunąć roztwór odbarwiający i wysuszyć żel w koncentratorze próżniowym Speed Vac®
    .
      Trzecia część procesu deglikozylacji w żelu, rozpoczynająca się od nawodnienia żelu roztworem PNGazy F i inkubacji.
      1. Uwodnić roztworem PNGazy F
      2. Inkubować przez 30 minut w temperaturze 37 °C
      .
        Czwarta część procesu deglikozylacji w żelu, rozpoczynająca się od dodania wody i inkubacji, a następnie usunięcia supernatantu zawierającego glikan.
        1. Dodaj wodę
        2. Inkubuj przez 2 godziny do nocy w temperaturze 37 °C
        3. Usuń supernatant zawierający glikan, analizuj w razie potrzeby
        .
          Ostatni etap procesu deglikozylacji w żelu rozpoczyna się od przemycia plastra żelu wodą, usunięcia płynu i wysuszenia plastra żelu.
          1. Umyć plasterek żelu wodą
          2. Usunąć i wyrzucić płyn
          3. Wysusz żel w koncentratorze próżniowym Speed Vac®
          4. Próbka jest teraz gotowa do rehydratacji w roztworze trypsyny
          .

            GlycoProfile™ II Enzymatic In-solution N-Deglycosylation Kit

            The GlycoProfile™ Enzymatic In-solution N-Deglycosylation Kit został zoptymalizowany w celu zapewnienia wygodnej i powtarzalnej metody usuwania glikanów N-linkowych z glikoprotein i jest kompatybilny z późniejszą analizą spektrometryczną MALDI-TOF bez zakłóceń ze strony któregokolwiek ze składników reakcji. Zestaw zawiera wystarczającą ilość enzymu, wzorca glikoproteiny i odczynników dla minimum 20 reakcji, gdy wielkość próbki wynosi od jednego do dwóch mg typowej glikoproteiny.

            Cechy i zalety

            • Zapewnia wszystkie składniki do deglikozylacji N-związanych białek w roztworze - wygodnie przygotowuje deglikozylowane próbki białek do analizy za pomocą MS, HPLC i PAGE
            • Odczynniki są zoptymalizowane pod kątem bezpośredniej analizy MS - nie ma potrzeby oczyszczania próbki po reakcji
            • Wykorzystuje PNGazę F do enzymatycznego usuwania N-linkowanych glikanów - białka pozostają nienaruszone.białka pozostają nienaruszone, w przeciwieństwie do stosowania chemicznej deglikozylacji, która może degradować białko
            • Zawiera PNGazę F i Trypsynę klasy proteomicznej - wysoce oczyszczone enzymy nie posiadają niepożądanych właściwości.wysoce oczyszczone enzymy nie posiadają niepożądanych aktywności ani dodatków komplikujących analizę
            • PNGaza F jest dostarczana w postaci liofilizowanej z buforu o niskiej zawartości soli - umożliwia rekonstytucję enzymu do dowolnego wymaganego stężenia

            Przepływ pracy deglikozylacji w roztworze

            Początek przepływu pracy deglikozylacji w roztworze, rozpoczynający się od podzielenia próbki glikoproteiny.

            Krok 1

            1. Próbka glikoproteiny
            .
              Drugi etap procesu deglikozylacji w roztworze, rozpoczynający się od dodania denaturatu i inkubacji, a następnie schłodzenia do temperatury pokojowej.
              1. Dodaj denaturat
              2. Inkubuj w temperaturze 100 °C przez 10 minut
              3. Schłodź do temperatury pokojowej
              .
                Ostatni etap procesu deglikozylacji w roztworze, rozpoczynający się od dodania buforu reakcyjnego i inkubacji, a następnie analizy (Mass Spec, PAGE, HPLC).
                1. Dodaj bufor reakcyjny i PNGazę F
                2. Inkubuj w temperaturze 37 °C przez 1 godzinę
                3. Analizuj za pomocą MS, PAGE lub HPLC
                .

                  Deglikozylacja w roztworze

                  Zestaw do enzymatycznej deglikozylacji białek

                  .Zestaw zawiera enzymy i odczynniki wymagane do deglikozylacji zarówno N- jak i O-linkowanych glikanów.

                  Cechy i zalety

                  • Pojedyncza reakcja przy neutralnym pH - nie ma potrzeby dostosowywania warunków dla każdej reakcji glikozydazy
                  • Natywna & procedury denaturujące - pozwala na elastyczność w celu zapewnienia wynikowej deglikozylacji.pozwala na elastyczność w celu zapewnienia, że powstałe deglikozylowane białka są kompatybilne z analizą down-stream
                  • Używa wysoko oczyszczonych glikozydaz, wolnych od zanieczyszczających proteaz - brak degradacji białka daje wyraźne, wiarygodne wyniki<
                  • Zawiera fetuinę, która ma sialilowane oligosacharydy N- i O-związane - zapewnia kontrolę w celu sprawdzenia skuteczności deglikozylacji
                  • Każda reakcja deglikozyluje 200 µg glikoproteiny - daje wystarczającą ilość deglikozylacji.daje wystarczającą ilość zdeglikozylowanego białka do dalszej analizy
                  • Zawiera odczynnik wystarczający do deglikozylacji ~2 mg białka - umożliwia przetwarzanie wielu próbek

                  Zestaw do natywnej deglikozylacji białek

                  Zestaw NDEGLY jest przeznaczony do deglikozylacji N-łączonych oligosacharydów z glikoprotein w warunkach natywnych. Poszczególne reszty, ze względu na ich lokalizację w natywnym białku, mogą być oporne na tradycyjne metody deglikozylacji przy użyciu PNGazy F. Zestaw NDEGLY wykorzystuje endoglikozydazy, które są mniej wrażliwe na konformację białka niż PNGaza F i dlatego są bardziej odpowiednie do deglikozylacji natywnych białek.

                  Cechy i zalety

                  • Zawarte enzymy są mniej wrażliwe na konformację białek niż PNGaza F - umożliwiają deglikozylację natywnych białek
                  • Używa wysoce oczyszczonych glikozydaz, wolnych od zanieczyszczających proteaz - brak degradacji białek zapewnia niezawodną deglikozylację natywnych białek.brak degradacji białka zapewnia wiarygodne, wyraźne dane
                  • Każda reakcja deglikozyluje 200 mg glikoproteiny - daje wystarczającą ilość zdeglikozylowanego białka do dalszej analizy
                  • Zawiera odczynnik wystarczający do deglikozylacji ~2 mg białka - umożliwia przetwarzanie wielu próbek

                  PNGase Fast

                  PNGase Fast pozwala badaczom na pewne i szybkie usuwanie glikozylacji N z białek i zachowanie nienaruszonej sekwencji pierwotnej glikanu i białka.

                  Cechy i zalety

                  • 25 minutowy czas przygotowania
                  • <= 20 minutowy czas reakcji
                  • Prosta, przejrzysta procedura przy użyciu 2 dostarczonych składników i 3 typowych materiałów laboratoryjnych
                  Materiały
                  Loading

                  Znajdź więcej zasobów technicznych w naszym centrum glikobiologii.

                  Powiązane artykuły
                  Powiązane kategorie produktów
                  Zaloguj się, aby kontynuować

                  Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.

                  Nie masz konta użytkownika?