Odczynniki i zestawy do qPCR Kapa Biosystems

Zestawy i odczynniki do ilościowego PCR w czasie rzeczywistym

Reakcje ilościowego PCR (qPCR) i qRT-PCR wymagają odczynników, które są dokładne i niezawodne. Odczynniki i zestawy Kapa Biosystems qPCR i qRT-PCR zostały zaprojektowane tak, aby zapewnić spójne wyniki nawet dla najtrudniejszych szablonów i materiałów wyjściowych. Zapoznaj się z naszymi odczynnikami do qPCR Kapa Biosystems i odkryj, jak możesz poprawić wydajność swojego przepływu pracy qPCR i określić ilościowo swój kolejny przełom.

• KAPA PROBE FAST
• KAPA PROBE FORCE
• KAPA SYBR^® FAST One-Step qRT-PCR Kits
• KAPA HRM FAST

KAPA PROBE FAST

Precyzyjne, powtarzalne i wszechstronne zestawy do wszystkich zastosowań qPCR opartych na sondach.

Zestawy qPCRKAPA PROBE FAST zapewniają szybkie i powtarzalne wyniki dla wszystkich zastosowań qPCR opartych na sondach. Zestawy te zawierają gotowe do użycia mieszanki wzorcowe do wysoce czułej i dokładnej reakcji PCR w czasie rzeczywistym z wykorzystaniem specyficznych dla sekwencji sond fluorogenicznych, w tym sond hydrolizujących (np. TaqMan^®), sond FRET i sond wypierających (np. molekularnych beaconów), latarnie molekularne).

• Kompatybilność z aplikacjami i instrumentami qPCR opartymi na sondach
• Dyskretne klastry w testach genotypowania SNP<
• Szeroki zakres dynamiczny
• Wysoce stabilna mieszanina wzorcowa dla wysokowydajnych przepływów pracy

Osiągnij doskonałą powtarzalność i wydajność

• Szybki, wysokowydajny pięciokolorowy multipleks PCR
• Podobne poziomy liczebności osiągane przy niskiej liczbie kopii
• Szeroki zakres dynamiczny do 10 rzędów wielkości

Rysunek 1. Wyniki dla wszystkich 5 amplikonów w 5-punktowej serii rozcieńczeń uzyskano podczas testu w penta-plex przy użyciu protokołu szybkiego cyklu. Objętości reakcji obejmowały również ludzkie genomowe DNA (0.39 - 100 ng), 200 nM każdego startera i 200 nM każdej sondy hydrolizującej (ACTB - FAM^™/BHQ^®-1, ERBB2 - CAL Fluor^® Gold 540/ BHQ-1, ERBB3 - CAL Fluor Orange 560/ BHQ-2, EGFR - CAL Fluor Red 610/ BHQ-2, ACTG1 - Quasar^® 705/ BHQ-2) przy użyciu następującego protokołu szybkiego cyklu: 95 ºC przez 3 min, a następnie 40 cykli 95 ºC, 15 s; 60 ºC, 15 s.

Accurately discriminate between alleles

• Exceptional differentiation of heterozygous and homozygous alleles
• Discrete clusters in SNP genotyping assays

Rysunek 2. Łącznie 168 próbek ludzkiego genomowego DNA zostało pomyślnie genotypowanych wraz z 24 kontrolami bez wzorca przy użyciu testu genotypowania SNP ATP1B3 w systemie PCR w czasie rzeczywistym ABI 7900HT. Objętości reakcji obejmowały również ludzkie genomowe DNA (10 ng), 200 nM każdego startera i 200 nM każdej sondy hydrolizy (Allele X - FAM / BHQ^®-1, Allele Y - VIC / BHQ-1) przy użyciu następującego standardowego protokołu cykli: 95ºC przez 10 min, a następnie 40 cykli 95ºC, 15 s; 60ºC, 60 s.

Zwiększenie elastyczności

• Kompatybilność zarówno ze standardowymi, jak i szybkimi protokołami cykli
• Zachowanie dokładności kwantyfikacji

Rysunek 3. Wykresy amplifikacji zostały wygenerowane przy użyciu standardowego protokołu cyklu (95ºC przez 10 minut, a następnie 40 cykli 95ºC, 15 sekund; 60ºC, 60 sekund) lub protokołu szybkiego cyklu: 95ºC przez 3 minuty, a następnie 40 cykli 95ºC, 3 sekundy; 60ºC, 20 sekund. Objętości reakcji obejmowały również ludzkie genomowe DNA (10-krotne rozcieńczenia w zakresie 0,1 ng - 100 ng na reakcję), 200 nM każdego startera i 200 nM sondy hydrolizy hApoB100 (FAM/BHQ-1).

KAPA PROBE FORCE

KAPA PROBE FORCE to nasza najbardziej odporna na inhibitory mieszanina wzorcowa qPCR, która eliminuje potrzebę oczyszczania DNA, umożliwiając usprawnienie przepływu pracy od próbki do Cq. Mieszanina wzorcowa zawiera polimerazę DNA trzeciej generacji opracowaną w celu przezwyciężenia inhibitorów PCR we krwi, tkankach i roślinach. Analizuj surowe próbki, które mają porównywalną dokładność, odtwarzalność i czułość jak próbki pochodzące z oczyszczonego DNA.

• KAPA PROBE FORCE zapewnia:
• Bezpośredni qPCR z surowej krwi, tkanek i ekstraktów roślinnych
• Przepływ pracy od próbki do Cq w <1 godzinę
• Wysoką wydajność dla dokładnych, powtarzalnych i czułych wyników
• Najwyższą tolerancję na inhibitory przenoszenia
• Kompatybilność multipleksowa z surowymi ekstraktami

Przepływy pracy Sample-to-Cq

KAPA PROBE FORCE umożliwia stosowanie szybkich metod ekstrakcji surowego DNA i pokonuje inhibitory przenoszenia. Konkurencyjne mieszanki wzorcowe stosowane w tradycyjnych procesach qPCR krwi, tkanek i roślin wymagają solidnego przetwarzania próbek (np,

• Eliminuj czas i koszty oczyszczania próbek poprzez amplifikację bezpośrednio z surowych próbek
• Analizuj szeroki zakres typów próbek, w tym pełną krew, komórki, ogony myszy, FFPE, liście, łodygi, nasiona i glebę

Generowanie dokładnych i powtarzalnych wyników

•  Zestawy zawierają polimerazę DNA trzeciej generacji, opracowaną z myślą o solidnej amplifikacji i wykrywaniu celu
  •  Enzym utrzymuje wysoką wydajność reakcji w obecności inhibitorów PCR, zapewniając niezawodne generowanie danych
  /li>
  •  Enzym utrzymuje wysoką wydajność reakcji w obecności inhibitorów PCR w celu niezawodnego generowania danych

Rysunek 5. Wysokowydajna amplifikacja docelowa. Zbadano wydajność reakcji uzyskaną dla próbek z domieszką inhibitora i porównano ją z wydajnością oczyszczonego DNA. W przypadku różnych typów inhibitorów wydajność utrzymywała się w granicach 90-110%.

Przełamywanie wysokich poziomów inhibitorów qPCR

KAPA PROBE FORCE wykazuje spójną i solidną amplifikację we wszystkich testowanych inhibitorach, bez zauważalnych opóźnień Cq.

•  Osiągnij wyższy poziom czułości dla zahamowanych próbek krwi, tkanek i roślin
•  Konwertuj oczyszczone testy DNA na surowe przepływy pracy bez utraty jakości danych

Rysunek 6. Szeroki zakres wysokiej odporności na inhibitory. Podstawowa wydajność KAPA PROBE FORCE i konkurencyjnych mieszanin wzorcowych została zmierzona poprzez utworzenie krzywych wzorcowych z oczyszczonym DNA zgodnie z zalecanymi przez producenta warunkami cyklu. Wykonano seryjne rozcieńczenia w następujących zakresach: Człowiek: 100 ng - 10 pg; Mysz: 100 ng - 10 pg; Roślina: 25 ng - 8 pg; i Bakterie: 2 ng - 2 fg. Inhibitory były indywidualnie dodawane do oczyszczonych próbek DNA w wysokich stężeniach w celu określenia ich wpływu na wartości Cq.

Wydajne multipleksowanie surowych próbek

• Przyspiesz analizę genotypów dzięki pojedynczej reakcji rozróżniania alleli surowych ekstraktów DNA
• Zmaksymalizuj zbieranie danych z cennych próbek, zwiększ przepustowość i zmniejsz koszty

Rysunek 7. Wykrywanie dupleksu SNP w próbce Cru5e. KAPA PROBE FORCE zapewnia dokładne genotypowanie i ścisłe grupowanie w obecności surowych ekstraktów (A) nasiona bawełny, ekstrakcja 0,5M NaOH; (B) liść winorośli, ekstrakcja 75 mM Tris-HCl i 5 mM TCEP; (C) krew myszy, krążek FTA 0,5 mm; oraz (D) ekstrakty z ogona myszy, ekstrakcja NaOH, do szybkiej analizy SNP.

Rysunek 8. Wysoka wydajność 4-pleksowa. Cztery cele amplifikowano w teście multipleksowym z użyciem KAPA PROBE FORCE i trzech konkurencyjnych mieszanin wzorcowych. Amplifikowano 100 pg mysiego gDNA ukierunkowanego na geny (A) Isg20 (FAM/BHQ-1), (B) F13a1 (CAL Fluor Orange 560), (C) Camta1 (Quasar 670) i (D) Ube20 (Quasar 705). Użyto 500 nM starterów i 110 nM sond z następującymi warunkami cyklu: 95 °C przez 30 s, a następnie 50 cykli 95 °C przez 3 s i 60 °C przez 30 s.

KAPA SYBR^® FAST One-Step qRT-PCR Kits

KAPA SYBR^® Zestawy FAST One-Step qRT-PCR zostały zaprojektowane z myślą o optymalnej wydajności w rygorystycznych warunkach reakcji qRT-PCR, wykazując znaczną poprawę czułości, swoistości, wydajności reakcji i fluorescencji. Zestaw jest zoptymalizowany pod kątem szybkiej, jednoetapowej kwantyfikacji RNA, zmniejszając zmienność eksperymentalną i zanieczyszczenie dzięki wygodnemu protokołowi qRT-PCR. Zestawy zawierają odwrotną transkryptazę M-MuLV, inhibitor RNazy i nową polimerazę DNA wyewoluowaną w drodze ukierunkowanej ewolucji.

Zestawy SYBR^® FAST One-Step qRT-PCR są odpowiednie do różnych zastosowań i obejmują:

• Genotypowanie SNP
• Analiza ekspresji genów
• Walidacja mikromacierzy
• walidacja genów typu knockdown
• badania nad RNAi i miRNA

Zwiększenie sygnału i wydajności reakcji

• Stale wyższa wydajność amplifikacji dla dokładnego qPCR
• Wyższa fluorescencja, wcześniejsze wartości Cq i lepsza wydajność reakcji

Rysunek 9. Gen RRMI (94 bp, 45,7% GC) amplifikowany z serii 10-krotnych rozcieńczeń RNA (100 ng do 10 pg na 20 μL reakcji) wyizolowanego z ludzkiego łożyska. KAPA SYBR^® FAST One-Step qRT-PCR Kit wykazuje wcześniejsze wartości Cq, wyższą fluorescencję i optymalną wydajność reakcji.

Amplikuj w szerokim zakresie długości docelowych

• Solidna wydajność niezależnie od wielkości amplikonu

Cele RNA bakteriofaga MS2 o rosnącej długości były amplifikowane przy 0,8 pg na 20 μL reakcji. Zestaw KAPA SYBR^® FAST One-Step qRT-PCR Kit utrzymał wysoką wydajność dla wszystkich długości amplikonów.

Poprawa czułości i odtwarzalności

• Dokładne badanie w szerokim zakresie stężeń matrycy RNA

Rysunek 11. Fragment 279 bp amplifikowany w 6 powtórzeniach z serii 10-krotnych rozcieńczeń komercyjnego bakteriofagowego RNA MS2 (80 pg do 0,8 fg na 20 μL reakcji). Wydajność reakcji 95% obliczona dla wszystkich 6 powtórzeń na dane.

Aby uzyskać więcej informacji, zapoznaj się z KAPA SYBR^® FAST One-Step qRT-PCR Kits FAQs.

KAPA HRM FAST

Dokładne wykrywanie zmienności sekwencji DNA

Analiza HRM (High Resolution Melt) to technika szybkiej, wysokowydajnej analizy post-PCR mutacji genetycznych lub zmienności sekwencji kwasów nukleinowych. Zestaw  KAPA HRM FAST Master Mix zawiera nową polimerazę DNA i system buforowy wraz z barwnikiem nasycającym EvaGreen®, który jest zoptymalizowany pod kątem maksymalnego rozróżniania wariantów sekwencji.

Zestawy KAPA HRM FAST zapewniają:

• Genotypowanie SNP
• Odkrywanie mutacji (skanowanie genów)
• Screening pod kątem heterozygotyczności
• DNA fingerprinting
• Analiza metylacji DNA

Accurately Detect Type IV SNPs

• 95% wykrywalności, nawet gdy konkurencja zawodzi*
• Reduced reaction times

Rysunek 12. *A) SNP typu IV rs641805 znajduje się na intronie genu dehydrogenazy dihydropirymidynowej (DPD). Reakcje obejmowały również 2,5 mM MgCl2, 0,2 μM każdego startera i 10 ng ludzkiego genomowego DNA. PCR i HRM przeprowadzono przy użyciu szybkiego, 2-etapowego protokołu cyklicznego (40 cykli) z 5-sekundową denaturacją (95 °C) i 20-sekundowym wyżarzaniem/wydłużaniem (60 °C).
*B) SNP typu IV rs641805 znajduje się na intronie genu dehydrogenazy dihydropirymidynowej (DPD). Reakcje obejmowały również 2,5 mM MgCl2, 0,2 μM każdego startera i 10 ng ludzkiego genomowego DNA. PCR i HRM przeprowadzono przy użyciu szybkiego, 2-etapowego protokołu cyklicznego (40 cykli) z 5-sekundową denaturacją (95 °C) i 20-sekundowym wyżarzaniem/wydłużaniem (60 °C). ABI MeltDoctor HRM Master Mix został użyty zgodnie z instrukcjami producenta, z tymi samymi próbkami matrycowego DNA.

Maksymalizacja różnic w wariantach sekwencji

•  Zaprojektowany, aby zmaksymalizować różnice w topnieniu
•  Poprawiona czułość

Maksymalizacja różnic w wariantach sekwencji

•  Zaprojektowany, aby zmaksymalizować różnice w topnieniu
•  Poprawiona czułość

Szybkie przejście od komórki do SNP

• Umożliwia ekstrakcję, amplifikację i HRM w czasie krótszym niż 2 godziny w połączeniu z zestawem KAPA Express Extract Kit

Rysunek 14. Ekstrakty DNA przygotowano z wymazów z policzka uzyskanych od 36 osób przy użyciu zestawów do ekstrakcji DNA KAPA Express Extract (zgodnie z zalecanymi protokołami). Ekstrakty DNA wykorzystano bezpośrednio w reakcjach zawierających również 2,5 mM MgCl2 i 0,2 μM każdego startera. PCR i HRM przeprowadzono przy użyciu szybkiego, 2-etapowego protokołu cyklicznego (45 cykli) z 5-sekundową denaturacją (95 °C) i 30-sekundowym wyżarzaniem/wydłużaniem (60 °C).