Wybór odpowiedniej niestandardowej sondy qPCR
Istnieje szeroki wybór niestandardowych sond, które mogą być używane do qPCR, a każda z nich ma zalety dla różnych zastosowań. Poniższe podsumowanie podkreśla zastosowania powszechnie używanych niestandardowych sond qPCR.
Podręcznik referencyjny zastosowań
.Reportery, wygaszacze i kompatybilność z urządzeniami
Nowoczesne platformy qPCR mają zazwyczaj wiele kanałów detekcji, co zapewnia elastyczność w wyborze etykiet sond. Ważne jest, aby wybrać etykiety fluorescencyjne, które są kompatybilne z kanałami detekcji urządzenia qPCR i zapewnić prawidłowe ustawienia filtra lub kalibrację detekcji dla urządzenia. Tabela kompatybilności reporterów i urządzeń zawiera listę niektórych z najczęściej używanych platform qPCR i wskazuje, które etykiety fluorescencyjne mogą być używane. Należy pamiętać, że nie wszystkie etykiety są wymienione i dostępnych jest wiele alternatywnych reporterów. Aby uzyskać informacje na temat stosowania niestandardowych etykiet z tymi platformami, należy skontaktować się z lokalnym specjalistą ds. obsługi technicznej.
Zamienniki barwników
Niektóre instrumenty qPCR wykorzystują zastrzeżone barwniki, które nie są ogólnie dostępne w handlu, takie jak VIC® i NED™. Przy poszukiwaniu alternatywnych barwników ważne są następujące kryteria:
- Długość fali wzbudzenia i detekcji są kompatybilne ze źródłem światła instrumentu i systemem detekcji
- W przypadku sond, wygaszacz skutecznie pochłania światło przy długości fali emisji reportera
- Im wyższy współczynnik ekstynkcji, tym jaśniejszy barwnik, co przyczynia się do czułej detekcji.
- W przypadku stosowania wielu barwników (multipleks), długości fal wzbudzenia i emisji każdego barwnika muszą być niezależne, aby uniknąć wzajemnego oddziaływania
Cząsteczki wygaszające
Cząsteczki wygaszające są zwykle umieszczane na końcu 3' sond jednocząsteczkowych, takich jak sondy podwójnie znakowane, sondy Molecular Beacons i sondy Scorpions. Wygaszaczami mogą być cząsteczki fluorescencyjne (TAMRA™) lub niefluorescencyjne (DABCYL, Black Hole Quencher™ (BHQ™). Aby uzyskać optymalną wydajność, widmo absorbancji wygaszacza powinno być jak najbardziej zbliżone do widma emisji reportera. Zalecane kombinacje reporter/wygaszacz można znaleźć w tabeli właściwości widmowych.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?