cOmplete™, protokół bez EDTA

Nr produktu. COEDTAF-RO

Protokół

.Minimalna objętość do rozpuszczenia jednej tabletki

Możliwe jest rozpuszczenie 1 tabletki w 2 ml podwójnej dest. wody (co daje 25-krotny roztwór podstawowy) bez żadnych problemów. Może to wymagać pozostawienia roztworu w temperaturze od +15 do +25 °C na 30-60 minut lub worteksowania.

cOmplete Inhibition of Endoproteinase Asp-N

cOmplete hamuje metaloproteazę endoproteinazę Asp-N.

cOmplete tabletki do stosowania w przygotowywaniu frakcji subkomórkowych z jelita

Nie zostało to przetestowane, ale powinno działać.

Użycie tabletek cOmplete w hodowli komórkowej

Zastosowaniem może być ekspresja/produkcja białka, które jest bardzo wrażliwe na proteazy. cOmplete Protease Inhibitor Cocktail może być stosowany do hamowania proteaz w pożywce/supernatancie hodowli komórkowych. Tabletki cOmplete zawierają składniki przepuszczalne dla błon, ale nie wszystkie z nich są przepuszczalne dla błon. Ponadto składniki o niskiej masie cząsteczkowej, które mogą wnikać do komórek, nie zostały przebadane pod kątem cytotoksyczności. Kilku klientów zgłosiło pomyślne stosowanie tabletek cOmplete w hodowli komórkowej w rozcieńczeniu od jednej trzeciej do jednej czwartej stężenia roboczego wskazanego w ulotce dołączonej do opakowania. Aby określić przydatność tabletek cOmplete do konkretnego zastosowania, należy empirycznie przetestować różne stężenia.

Wpływ inhibitora cOmplete na nukleazy, takie jak DNaza I i RNaza A

Firma Roche nie przeprowadziła systematycznych badań wpływu tabletek koktajlu inhibitora proteazy cOmplete na DNazę I i RNazę A.EDTA jest dwuwartościowym chelatorem i może inaktywować nukleazy, takie jak Mg²⁺ wymagane do aktywności DNazy I. Chociaż niskie stężenia EDTA są obecne w buforach reakcyjnych wielu endonukleaz restrykcyjnych, najlepszym rozwiązaniem może być stosowanie tabletek cOmplete bez EDTA.

Wpływ cOmplete na fosfatazy

cOmplete Protease Inhibitor Cocktail Tablets nie były systematycznie testowane pod kątem hamowania fosfataz przez firmę Roche.Wiadomo, że EDTA hamuje fosfatazę alkaliczną, więc jak wskazano powyżej, najlepszym rozwiązaniem może być stosowanie tabletek z inhibitorem proteazy cOmplete niezawierających EDTA.

Usuwanie cOmplete z preparatów za pomocą dializy

Używaj błony dializacyjnej o odcięciu >10 kDa.