Protokół przygotowania i hodowli kriokonserwowanych i proliferujących komórek PromoCell^®

Produkty te są dostępne w Stanach Zjednoczonych, Kanadzie i wybranych krajach europejskich.

• Protokół obsługi i hodowli kriokonserwowanych komórek pierwotnych.
• Protokół postępowania z pierwotnymi komórkami proliferującymi i ich hodowli
• Protocol for Primary Cell Subcultivation

Protocol for Handling and Cultivating Cryopreserved Primary Cells

Important Notes:

• Po dostarczeniu, przechowuj kriokonserwowane komórki w ciekłym azocie lub natychmiast je posiej. Przechowywanie w temperaturze -80°C nie jest wystarczające do zachowania komórek i powoduje ich nieodwracalne uszkodzenie.
• Obsługuj przy użyciu techniki aseptycznej i w komorze bezpieczeństwa biologicznego z przepływem laminarnym.

1. Przygotuj pożywkę
   Oblicz potrzebną powierzchnię hodowli zgodnie z gęstością posiewu (patrz tabela poniżej) i liczbą komórek dla danej partii podaną w certyfikacie analizy. Napełnij naczynia do hodowli komórkowej odpowiednią objętością pożywki PromoCell^® Growth Medium (co najmniej 9 ml na fiolkę z komórkami). Umieścić naczynia w inkubatorze (37°C, 5% CO₂) na 30 minut.
   
   
2. Rozmrażanie komórek
   Wyjąć fiolkę z pojemnika z ciekłym azotem i natychmiast umieścić w suchym lodzie - nawet na czas krótkiego transportu. W komorze z przepływem laminarnym krótko przekręć nakrętkę o ćwierć obrotu, aby zmniejszyć ciśnienie, a następnie ponownie dokręć. Zanurzyć fiolkę w łaźni wodnej (37°C) aż do zakrętki na 2 minuty. Upewnij się, że woda nie dostała się do gwintu zakrętki.
   
   
3. Dezynfekcja fiolki i wysiew komórek
   Dokładnie przepłucz fiolkę 70% etanolem w komorze z przepływem laminarnym. Następnie odessać nadmiar etanolu z obszaru gwintu zakrętki. Otwórz fiolkę i przenieś komórki do naczynia do hodowli komórkowej zawierającego wstępnie ogrzaną pożywkę z kroku 1.
   
   
4. Inkubuj komórki
   Umieść naczynie w inkubatorze (37 °C, 5% CO₂) w celu przyłączenia komórek. Wymień pożywkę po 16-24 godzinach, a następnie co dwa do trzech dni. Komórki powinny być podhodowane zgodnie z protokołem podhodowli (patrz poniżej), gdy osiągną 70-90% konfluencji.

 

.Protokół obsługi i hodowli pierwotnych komórek proliferujących

Pierwotne komórki PromoCell są dostępne w formacie proliferującym (bez kriokonserwacji).

Ważne uwagi:

• Rozpocznij natychmiast po dostawie.
• Używaj techniki aseptycznej i pracuj w komorze bezpieczeństwa biologicznego z przepływem laminarnym.

1. Inkubacja komórek
   Opakuj naczynie hodowlane, nie otwieraj pokrywy i natychmiast umieść je w inkubatorze (37 °C, 5% CO₂) na 3 godziny, aby umożliwić komórkom regenerację po transporcie.
   
   
2. Wymień podłoże transportowe
   Ostrożnie otwórz naczynie, opłucz wewnętrzną stronę pokrywy 70% etanolem i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu. Odessać medium transportowe z naczynia. Dodaj 10 ml odpowiedniej pożywki PromoCell^® Cell Growth Medium.
   
   
3. Sprawdź i inkubuj komórki
   Sprawdź gęstość komórek. Otwórz pokrywkę o pół obrotu i umieść naczynie w inkubatorze (37 °C, 5% CO₂). Zmieniaj pożywkę co dwa do trzech dni. Komórki powinny być subkulturowane zgodnie z protokołem subkulturowania (patrz poniżej), gdy osiągną 70-90% konfluencji.

 

Primary Cell Subcultivation Protocol

Important Notes:

• Stosować technikę aseptyczną i komorę bezpieczeństwa biologicznego z przepływem laminarnym.
• Ze względu na niską zawartość surowicy lub jej brak, pożywki PromoCell^® nie nadają się do neutralizacji trypsyny (na przykład podczas podhodowli komórek).Zamiast tego zalecamy użycie zestawu DetachKit (C-41200, C-41210, C-41220), który zawiera HEPES BSS, trypsynę/EDTA i roztwór neutralizujący trypsynę.

1. Przygotowanie odczynników i płukanie komórek
   Umieść PromoCell^® DetachKit w temperaturze pokojowej na co najmniej 30 minut, aby dostosować temperaturę odczynników. Ostrożnie odessać pożywkę z naczynia hodowlanego. Dodaj 100 µl roztworu HEPES BSS na cm² powierzchni naczynia, aby umyć komórki i ostrożnie mieszaj naczynie przez 15 sekund.
   
   
2. Odłącz komórki
   Uwaga: Zalecamy odłączanie komórek w temperaturze pokojowej.
   
   Ostrożnie odessać HEPES BSS z naczynia hodowlanego. Dodaj 100 µl roztworu trypsyny/EDTA na cm² powierzchni naczynia. Zamknij naczynie i zbadaj komórki pod mikroskopem. Gdy komórki zaczną się oddzielać, delikatnie postukaj w bok naczynia hodowlanego, aby usunąć pozostałe komórki.
   
   
3. Zneutralizuj trypsynę i zbierz komórki
   Dodaj 100 µL roztworu neutralizującego trypsynę na cm² powierzchni naczynia i delikatnie wstrząśnij naczyniem w celu wymieszania. Ostrożnie odessać zawiesinę komórek pipetą i przenieść do probówki do wirowania. Wiruj komórki przez trzy minuty z prędkością 220 x g.
   
   
4. Inkubuj komórki
   Odrzuć supernatant z osadu komórek. Dodać 1 ml odpowiedniej pożywki PromoCell^® Cell Growth Medium i ponownie zawiesić komórki, delikatnie pipetując w górę i w dół. Umieść komórki zgodnie z zalecaną gęstością wysiewu w nowych naczyniach do hodowli komórkowej zawierających podgrzaną pożywkę do hodowli komórkowej. Umieść naczynia w inkubatorze (37°C, 5% CO₂) i zmieniaj pożywkę co dwa do trzech dni.

Product #*	Description	Recommended Culture Media*	Plating Density	Przechodzenie po rozmrożeniu	Marker	Podwojenie populacji
C-12810	Miocyty ludzkiego serca (HCM)	C-22070	10,000 - 15,000 komórek na cm²	P2	Sarcomeric alpha-Actinin+ Slow muscle myosin+	> 15
C-12980	Human Pericytes from Placenta (hPC-PL)	C-28040	3,000 - 4,000 komórek na cm²	P2
C-12620	Ludzkie komórki nabłonka nosa (HNEpC)	C-21060	10 000 - 15 000 komórek na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
C-12644	Człowiecze komórki nabłonka tchawicy (HTEpC)	C-21060	10,000 - 15,000 komórek na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
C-12640	Ludzkie komórki nabłonka oskrzeli (HBEpC)	C-21060	10 000 - 15 000 komórek na cm²	P2	Cytokeratyna+	> 15
C-12642	Human Small Airway Epithelial Cells (HSAEpC)	C-21070	10,000 - 15,000 komórek na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
C-12665	Ludzkie komórki nabłonka nerek (HREpC)	C-26001 C-26030	10 000 - 15 000 komórek na cm²	P2	Cytokeratyna+	> 15
C-12660	Human Renal Cortical Epithelial Cells (HRCEpC)	C-26001 C-26030	10,000 - 15,000 komórek na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
C-12001	Normalne ludzkie keratynocyty naskórkowe (NHEK), młodzieńczy napletek, pojedynczy dawca	C-20011	5 000 komórek na cm²	P2	Cytokeratyna+	> 15
C-12005	Normalne ludzkie keratynocyty naskórkowe (NHEK), młodzieńczy napletek, połączone	C-20011	5,000 komórek na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
C-12003	Normalne ludzkie keratynocyty naskórkowe (NHEK), dorosły, pojedynczy dawca	C-20011	5 000 komórek na cm²	P2	Cytokeratyna+	> 15
C-12006	Normalne ludzkie keratynocyty naskórkowe (NHEK), dorosłe, połączone	C-20011	5,000 komórek na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
C-12710	Ludzkie chondrocyty (HCH)	C-27101	10,000 - 20,000 komórek na cm²	P2	Testowane zróżnicowanie	> 10
C-12533	Ludzkie komórki mięśni gładkich aorty (HAoSMC)	C-22062	7 500 - 10 000 komórek na cm²	P2	Mięśnie gładkie a-aktyna+	> 15
C-12511	Człowiecze komórki mięśni gładkich tętnic wieńcowych (HCASMC)	C-22062	7 500 - 10 000 komórek na cm²	P2	Mięsień gładki a-aktyna+	> 15
C-12521	Ludzkie komórki mięśni gładkich tętnicy płucnej (HPASMC)	C-22062	7,500 - 10,000 komórek na cm²	P2	Mięsień gładki a-aktyna+	> 15
C-12500	Komórki mięśni gładkich tętnicy pępowinowej człowieka (HUASMC)	C-22062	7,500 - 10,000 komórek na cm²	P2	Mięśnie gładkie a-aktyna+	> 15
C-12565	Ludzkie komórki mięśni gładkich tchawicy (HTSMC)	C-22062	7,500 - 10,000 komórek na cm²	P2	Mięsień gładki a-aktyna+	> 15
C-12561	Ludzkie komórki mięśni gładkich oskrzeli (HBSMC)	C-22062	7 500 - 10 000 komórek na cm²	P2	Mięsień gładki a-aktyna+	> 15
C-12575	Komórki mięśni gładkich macicy (HUtSMC)	C-22062	7,500 - 10,000 komórek na cm²	P2	Mięsień gładki a-aktyna+	> 15
C-12530	Ludzkie komórki mięśni szkieletowych (SkMC)	C-23060 C-23061	3 500 - 7 000 komórek na cm²	P2	Sarcomeric myosin+ Testowane różnicowanie	> 15
C-12300	Normalne ludzkie fibroblasty skórne (NHDF), młodzieńczy napletek	C-23010	3 500 - 7 000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 15
C-12302	Normalne ludzkie fibroblasty skórne (NHDF), dorosły dawca	C-23020	3 500 - 7 000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 15
C-12360	ludzkie fibroblasty płucne (HPF)	C-23020	3,500 - 7,000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 15
C-12380	Human Aortic Adventitial Fibroblasts (HAoAF)	C-23020	3 500 - 7 000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 10
C-12375	Human Cardiac Fibroblasts (HCF)	C-23025	3 500 - 7 000 komórek na cm²	P2	CD90+ Mięśnie gładkie α-aktyna- miozyna-	> 15
C-12385	Ludzkie fibroblasty macicy (HUF)	C-23020	3 500 - 7 000 komórek na cm²	P2	CD90+	> 15
C-12720	Ludzkie osteoblasty (HOB)	C-27001 C-27020	10,000 - 20 000 komórek na cm²	P2	Testowana fosfataza alkaliczna+ Mineralizacja	> 10
C-12200	Komórki śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC), pojedynczy dawca	C-22010 C-22011	5 000 -10 000 komórek na cm²	P1	vW+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12203	Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC), pooled	C-22010 C-22011	5,000 -10,000 komórek na cm²	P1	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12206	Komórki śródbłonka żyły pępowinowej człowieka (HUVEC) izolowane w pożywce wzrostowej 2, pojedynczy dawca	C-22011	5,000 -10,000 komórek na cm²	P1	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12208	Ludzkie komórki śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC) izolowane w pożywce wzrostowej 2, połączone	C-22011	5,000 -10,000 komórek na cm²	P1	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12205	Człowiecze komórki śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC), wstępnie przesiewane	C-22010 C-22011	5,000 -10,000 komórek na cm²	P1	> 15
C-12202	Komórki śródbłonka tętnicy pępowinowej (HUAEC)	C-22010 C-22011	5 000 -10 000 komórek na cm²	P1	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12271	Human Aortic Endothelial Cells (HAoEC)	C-22020 C-22022	5,000 -10,000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12221	Ludzkie komórki śródbłonka tętnicy wieńcowej (HCAEC)	C-22020 C-22022	5 000 -10 000 komórek na cm²	P3	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12241	Human Pulmonary Artery Endothelial Cells (HPAEC)	C-22010 C-22011	5,000 -10,000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12231	Komórki śródbłonka żyły odpiszczelowej (HSaVEC)	C-22010 C-22011	5,000 -10,000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12210	Human Dermal Microvascular Endothelial Cells (HDMEC), juvenile foreskin	C-22020 C-22022	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12212	Human Dermal Microvascular Endothelial Cells (HDMEC), adult donor	C-22020 C-22022	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12215	Ludzkie komórki śródbłonka mikronaczyniowego skóry (HDMEC), wstępnie przebadane	C-22020 C-22022	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+ VEGF response+	> 15
C-12211	Human Dermal Blood Endothelial Cells (HDBEC), juvenile foreskin	C-22020	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	Podoplanin- CD31+	> 15
C-12225	Człowiecze komórki śródbłonka krwi skórnej (HDBEC), dorosły dawca	C-22020	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	Podoplanin- CD31+	> 15
C-12216	Human Dermal Lymphatic Endothelial Cells (HDLEC), juvenile foreskin	C-22022	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	Podoplanin+ CD31+	> 15
C-12217	Ludzkie komórki śródbłonka limfatycznego skóry (HDLEC), dawca dorosły	C-22022	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	Podoplanin+ CD31+	> 15
C-12285	Human Cardiac Microvascular Endothelial Cells (HCMEC)	C-22020 C-22022	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 10
C-12281	Ludzkie komórki śródbłonka mikronaczyń płucnych (HPMEC)	C-22020 C-22022	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12295	Human Uterine Microvascular Endothelial Cells (HUtMEC)	C-22020 C-22022	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	vWF+ CD31+ Dil-Ac-LDL uptake+	> 15
C-12400	Normalne ludzkie melanocyty naskórkowe (NHEM), młodzieńczy napletek	C-24010	5,000 - 10,000 komórek na cm²	P2	Mel-5+	> 15
C-12402	Normalne ludzkie melanocyty naskórkowe (NHEM), młodzieńczy napletek, hodowane w pożywce M2	5,000 - 10,000 komórek na cm²	P2	Mel-5+	> 15
C-12403	Normalne ludzkie melanocyty naskórkowe (NHEM), dorosły dawca, hodowane w pożywce M2	C-24300	5 000 - 10 000 komórek na cm²	P2	Mel-5+	> 15
C-12730	Human White Preadipocytes (HWP) podskórne	C-27410 C-27436 C-27438	5 000 komórek na cm²	P2	Testowane zróżnicowanie	> 10
C-12732	Human White Preadipocytes (HWP) visceral	C-27410 C-27436 C-27438	5,000 komórek na cm²	P2	Testowane zróżnicowanie	> 10

*numery katalogów w tej tabeli dotyczą kriokonserwowanych komórek i nośników w opakowaniach gotowych do użycia