MSAMZEO

Mouse Whole Genome SAM CRISPRa Pooled Lentiviral Library Kit Zeo

• Kod UNSPSC: 41105904
• NACRES: NE.02

Właściwości

• opakowanie: pkg of 40 vials (8x25μL aliquots for each of the 5 kit components)
• Zastosowanie: CRISPR
• Warunki transportu: dry ice
• temp. przechowywania: −70°C

Opis

Opis ogólny

Aktywator transkrypcyjny VP64 połączony z nukleazą SpCas9 (dCas9) tworzy kompleks rybonukleoproteinowy (RNP) z RNA-przewodnikiem CRISPR (gRNA). Sekwencje łodygi i tetra-pętli w rusztowaniu gRNA zostały zmodyfikowane w minimalne aptamery RNA spinki do włosów, które selektywnie wiążą dimeryzowane białka płaszcza bakteriofaga MS2. Białko płaszcza MS2 jest połączone z podjednostką p65 NF-kappaB (NFκB) i domeną aktywacyjną ludzkiego czynnika szoku cieplnego 1 (HSF1). Prowadnica RNA zawiera dwa aptamery, z których każdy może wiązać dwa białka koaktywatora MS2, skutecznie rekrutując cztery koaktywatory dla każdego kompleksu aktywatora celującego CRISPR.

Konstrukty pomocnicze dCas9-VP64, MS2-p65-HSF1 i gRNA są dostarczane jako trzy oddzielne plazmidy/cząsteczki lentiwirusowe. W przeciwieństwie do macierzowych bibliotek gRNA zawierających każdy klon w osobnym dołku na płytce, zbiorcze biblioteki gRNA zawierają tysiące pojedynczych gRNA w jednej probówce, umożliwiając wydajne przesiewanie całego ludzkiego genomu (ponad 16 000 genów) na stole laboratoryjnym bez robotyki lub specjalistycznego sprzętu. Biblioteka SAM CRISPR jest dostarczana w 3 podpulach. Każda z nich zawiera około 23 500 gRNA, po 3 gRNA na RefSeqID. Biblioteka całego genomu zawiera łącznie około 70 000 gRNA ukierunkowanych na 19 000 unikalnych symboli genów (w tym alternatywne izoformy obejmujące 23 500 RefSeqID).

100 niecelujących (tj. negatywnych) kontrolnych gRNA jest zawartych w każdej puli do wykorzystania jako punkt odniesienia w statystycznej charakterystyce zmian częstotliwości gRNA mierzonych przez głębokie sekwencjonowanie. Negatywne gRNA kontrolne mają minimalną homologię z genomem docelowym i nie powinny ulegać znaczącym zmianom w reprezentacji podczas leczenia komórek kontrolnych. Ze względu na charakter eksperymentów przesiewowych z aktywatorami CRISPR, kontrole pozytywne muszą być określane empirycznie, biorąc pod uwagę specyficzny fenotyp, który ma być badany na ekranie. Łącznie kontrole te stwarzają wiele możliwości wcześniejszego projektowania eksperymentów i późniejszej analizy danych.

Zastosowanie

• Genomika funkcjonalna
• Walidacja celu
• Badanie przesiewowe zysku funkcji w całym genomie

Cechy i korzyści

• Wysoka specyficzność i aktywność
• Cząsteczki lentiwirusowe o wysokiej czystości i wysokim mianie, zweryfikowane pod względem sekwencji
• Aktywuje geny poprzez aktywację transkrypcyjną zamiast nadekspresji opartej na cDNA

Dowiedz się więcej o aktywatorach SAM CRISPR na stronie SigmaAldrich.com/CRISPRa.

Komponenty

This kit contains 5 components:

2 Helper Constructs with a minimum concentration of 1x10⁶ VP/mL(via p24 assay)

• 8 x 25μl vials of dCas9-VP64-Blasticidin SAM CRISPRa Helper Construct 1 Lentiviral Transduction Particles
• 8 x 25μl vials of MS2-P65-HSF1-Hygromycin SAM CRISPRa Helper Construct 2 Lentiviral Transduction Particles

3 Subpools with a minimum concentration of 5x10⁸ VP/mL(via p24 assay)

• 8 x 25μl vials of Mouse SAM CRISPRa Library Pool 1 - Zeo
• 8 x 25μl vials of Mouse SAM CRISPRa Library Pool 2 - Zeo
• 8 x 25μl vials of Mouse SAM CRISPRa Library Pool 3 - Zeo

Zasada

Systemy CRISPR/Cas są wykorzystywane przez bakterie i archeony do obrony przed inwazją wirusów i plazmidów. Niedawno system CRISPR/Cas typu II z bakterii Streptococcus pyogenes został zaprojektowany do funkcjonowania w systemach eukariotycznych przy użyciu dwóch składników molekularnych: pojedynczego białka Cas9 i niekodującego RNA (gRNA). Endonukleaza Cas9 może być nieaktywna (dCas9) z mutacjami w dwóch domenach białkowych, RuvC i HnH (odpowiednio D10A i H840A), które są odpowiedzialne za aktywność nukleazy. Białko z niedoborem nukleazy można następnie połączyć z aktywatorem transkrypcyjnym VP64 i wykorzystać w połączeniu z RNA-przewodnikiem zmodyfikowanym aptamerami MS2 RNA, które działają w celu rekrutacji dodatkowych koaktywatorów transkrypcyjnych p65 i HSF1. Zmontowany kompleks SAM jest następnie wykorzystywany jako system dostarczania ładunku do docelowych promotorów genów, umożliwiając specyficzną dla miejsca aktywację transkrypcji interesującego nas genu.[1]

Definicja jednostki

VP/ml jest jednostką miary stężenia dla miana wirusa oszacowanego za pomocą testu p24.

Informacje prawne

Umowa licencyjna na użytkowanieCRISPR

Licencje na fluorofory Lentiviral, WPRE i Evrogen

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 10 - Combustible liquids