B20221

Mieszanka kolagenaza-DNaza I

Tissue dissociation blend, lyophilized powder, suitable for cell culture

• NACRES: NA.54
• UNSPSC Code: 12352204
• Specific activity: (Collagenase (FALGPA assay) 1.0-5.0 units/ml in 10 ml HBSS (#H6648)), (Deoxyribonuclease I activity: 200-2000 Kunitz units/ml in 10 ml HBSS (#H6648))

Właściwości

• Quality Segment: 200
• form: lyophilized powder
• specific activity: (Collagenase (FALGPA assay) 1.0-5.0 units/ml in 10 ml HBSS (#H6648)), (Deoxyribonuclease I activity: 200-2000 Kunitz units/ml in 10 ml HBSS (#H6648))
• storage temp.: -10 to -25°C

Opis

General description

Mieszanka kolagenazy i DNAzy I jest koktajlem enzymów do dysocjacji tkanek w celu izolacji komórek. Proces dysocjacji tkanek polega na uwolnieniu funkcjonalnych i żywotnych komórek z tkanek zwierzęcych, przy minimalnym wpływie na żywotność komórek. Głównym odczynnikiem stosowanym w procesie dysocjacji tkanek jest kolagenaza. Kolagenazy to enzymy, które rozkładają natywny kolagen utrzymujący tkanki zwierzęce razem. Drugim enzymem znajdującym się w naszej mieszance jest deoksyrybonukleaza I (DNaza I). DNaza I jest endonukleazą z rodziny DNaz, której szczególną rolą jest degradacja DNA. DNaza I jest jedną z najlepiej scharakteryzowanych endonukleaz pochodzenia ssaczego. Podczas dysocjacji tkanki, części komórek są lizowane, co powoduje uwolnienie DNA. Monomolekularne DNA może powodować zlepianie się komórek, więc dodanie DNazy I do naszej mieszanki prowadzi do degradacji tego pozakomórkowego DNA, unikając w ten sposób utraty komórek z powodu niepożądanego zlepiania się.

Biochem/physiol Actions

Kolagenaza: Skuteczne uwolnienie komórek z tkanki wymaga działania enzymów kolagenazy. Kolagenaza jest aktywowana przez cztery gramy wapnia (Ca2+) na mol enzymu. Optymalne pH wynosi 6,3-8,8. Enzym ten jest zwykle stosowany do trawienia składników łącznych w próbkach tkanek w celu uwolnienia poszczególnych komórek. Leczenie kolagenazą może spowodować śmierć niektórych komórek. Zazwyczaj do trawienia stosuje się stężenia od 0,1 do 5 mg/ml. Czas trwania reakcji waha się od 15 minut do kilku godzin i zapewnia zadowalającą dysocjację komórek bez powodowania zbyt dużej ich śmierci. DNaza: DNaza I jest endonukleazą, która działa na wiązania fosfodiestrowe przylegające do pirymidyn w celu wytworzenia polinukleotydów z końcowymi 5′-fosforanami. W obecności Mg2+, DNAza I rozszczepia każdą nić DNA niezależnie, a miejsca rozszczepienia są losowe. Obie nici DNA są rozszczepiane w przybliżeniu w tym samym miejscu w obecności Mn2+. Stwierdzono, że optymalne pH wynosi od 7 do 8. Kationy dwuwartościowe, takie jak Mn2+, Ca2+, Co2+ i Zn2+ są aktywatorami enzymu. Stężenie 5 mM Ca2+ stabilizuje enzym przed trawieniem proteolitycznym. DNAza I z trzustki bydlęcej składa się z czterech chromatograficznie rozróżnialnych składników, A, B, C i D, których stosunek molowy wynosi 4:1:1. Znaleziono tylko niewielkie ilości D. Wiadomo, że 2-merkaptoetanol, chelatory, dodecylosiarczan sodu (SDS) i aktyna hamują aktywność enzymu.

Preparation Note

Dla stężenia roboczego: Kolagenazy 1 mg/ml i Deoksyrybonukleazy I 0,1 mg/ml, odtworzyć liofilizowany proszek z 10 ml zbilansowanego roztworu soli Hanka z wodorowęglanem sodu, bez czerwieni fenolowej, chlorku wapnia i siarczanu magnezu (#H6648).

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Klasa składowania: 13 - Non Combustible Solids
• wgk: WGK 3