P6782

Peroxidasa from horseradish

Type VI-A, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol), 950-2000 units/mg solid (using ABTS)

• Sinónimos: Donante:peróxido de hidrógeno oxidorreductasa, Peroxidasa de rábano picante
• Número de CAS: 9003-99-0
• Comisión internacional de enzimas: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-668-6
• MDL number: MFCD00071339
• UNSPSC Code: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Propiedades

• type: Type VI-A
• form: essentially salt-free, lyophilized powder
• specific activity: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol); 950-2000 units/mg solid (using ABTS)
• mol wt: ~44 kDa
• solubility: 0.1 M phosphate buffer: soluble 10 mg/mL, clear, orange to red (pH 6.0); H₂O: soluble
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• storage temp.: 2-8°C
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• InChI key: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Descripción

General description

La peroxidasa de rábano picante se aísla de las raíces de rábano picante (Amoracia rusticana) y pertenece al grupo de ferroprotoporfirina de las peroxidasas. La HRP es un polipéptido monocatenario que contiene cuatro puentes bisulfuro. Es una glucoproteína que contiene un 18 % de carbohidratos. La composición de los carbohidratos consiste en galactosa, arabinosa, xilosa, fucosa, manosa, manosamina y galactosamina dependiendo de la isoenzima específica. Su peso molecular (~44 kDa) incluye la cadena polipeptídica (33 890 dalton), la hemina más Ca²⁺ (~700 dalton) y los carbohidratos (~9 400 dalton). Existen al menos siete isoenzimas de la HRP. El punto isoeléctrico de las isoenzimas de la peroxidasa de rábano picante oscila entre 3,0 y 9,0.

Application

La enzima de Sigma se ha utilizado en el desarrollo de un biosensor de galactosa oxidasa-peroxidasa rápido y sensible para la detección de galactosa con estabilidad prolongada. Se ha utilizado como componente de una placa de medios (agar MRS) que contiene 3,3′,5,5′-tetrametilbencidina (TMB) para el crecimiento del género Lactobacillus. La TMB actúa como sustrato cromógeno de la peroxidasa. La peroxidasa genera O₂ a partir del H₂O₂ producido por los lactobacilos, y la TMB tiñe las colonias de color azul en presencia de O₂. Por tanto, después de 48 horas de incubación en CO₂ al 5 %, las colonias que producen H₂O₂ en agar MRS aparecen de color azul oscuro. Las bacterias no productoras de_{H 2}O₂ son incoloras. Se ha utilizado para estudiar el efecto estabilizador del alcohol polivinílico sobre la peroxidasa de rábano picante. También se utiliza para la determinación de glucosa y peróxidos en disolución.

La peroxidasa de rábano picante (HRP) se aísla de las raíces de rábano picante (Amoracia rusticana). Se utiliza en aplicaciones bioquímicas como las transferencias Western, el ELISA y la inmunohistoquímica. La peroxidasa de rábano picante se utiliza para amplificar una señal débil y aumentar la detectabilidad de una molécula específica, como una proteína. El producto P6782 es de tipo VI-A y es esencialmente un polvo liofilizado sin sal. Se utiliza para cuantificar el colesterol y los ésteres de colesterol y para estudiar la deposición de lípidos in vitro en lentes de contacto de hidrogel y de hidrogel de silicona.

Biochem/physiol Actions

Cuando se incuba con un sustrato, la peroxidasa de rábano picante produce un derivado coloreado, fluorimétrico o luminiscente de la molécula marcada, lo que permite su cuantificación. Se ha demostrado que la peroxidasa de rábano picante reduce ligeramente el nivel de inhibición en un mutante cydAB.

La HRP se combina fácilmente con el peróxido de hidrógeno (H₂O₂) y el complejo resultante [HRP-H₂O₂] puede oxidar una amplia variedad de donantes de hidrógeno. El pH óptimo es 6,0-6,5 y la enzima es más estable en el intervalo de pH de 5,0-9,0. La HRP puede conjugarse con anticuerpos mediante diversos métodos diferentes, como el empleo de glutaraldehído, la oxidación de peryodato, los enlaces disulfuro y también a través de reticulantes de amino y tiol dirigidos. Es más pequeña y más estable que las etiquetas enzimáticas β-galactosidasa y fosfatasa alcalina. Por lo tanto, es la etiqueta más deseada. Además, su glucosilación induce una menor unión inespecífica. Acida sódica, cianuros, L-cistina, dicromatos, etilenotiourea, hidroxilamina, sulfuros, vanadatos, ácido p-aminobenzoico, así como los iones Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, NI²⁺ y Pb²⁺ inhiben la actividad enzimática.

Packaging

Envasados en mg sólidos

Linkage

Similar a P8375

Unit Definition

Una unidad de ABTS oxidará 1 μmol de ABTS por minuto a 25 °C a pH 5,0

Una unidad de pirogalol formará 1,0 mg de purpurogalina a partir de pirogalol en 20 segundos a pH 6,0 a 20 °C.

Preparation Note

Las disoluciones de este producto a 1 mg/ml en tampón fosfato 0,1 M (pH 6,0) permanecen activas al menos durante dos semanas a temperatura ambiente. La disolución retiene la actividad después de 5 ciclos de congelación y descongelación.

Analysis Note

Este producto se analiza utilizando ABTS para facilitar la comparación con la unidad de otros proveedores: aproximadamente 1 000 unidades por mg de sólido

La RZ (Reinheitszahl) es la relación de absorbancia A₄₀₃/A₂₇₅ determinada a 0,5-1,0 mg/ml en agua desionizada. Es una medida del contenido de hemina, no de la actividad enzimática. Incluso preparaciones con RZ elevada pueden tener una actividad enzimática baja.

Other Notes

Véase más información sobre la peroxidasa en www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Información de seguridad

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Storage Class: 11 - Combustible Solids
• wgk_germany: WGK 1
• ppe: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)