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  • Methods for differential and quantitative analyses of brain neurosteroid levels by LC/MS/MS with ESI-enhancing and isotope-coded derivatization.

Methods for differential and quantitative analyses of brain neurosteroid levels by LC/MS/MS with ESI-enhancing and isotope-coded derivatization.

Journal of pharmaceutical and biomedical analysis (2015-09-12)
Tatsuya Higashi, Naoto Aiba, Tomoya Tanaka, Kazumi Yoshizawa, Shoujiro Ogawa
ZUSAMMENFASSUNG

The analysis of changes in the brain neurosteroid (NS) levels due to various stimuli can contribute to the elucidation of their physiological roles, and the discovery and development of new antipsychotic agents targeting neurosteroidogenesis. We developed methods for the differential and quantitative analyses of the brain levels of allopregnanolene (AP) and its precursor, pregnenolone (PREG), using liquid chromatography/electrospray ionization-tandem mass spectrometry (LC/ESI-MS/MS) combined with derivatization using 2-hydrazino-1-methylpyridine (HMP) and its isotope-coded analogue, (2)H3-HMP (d-HMP). For the differential analysis, the brain sample of an untreated rat was derivatized with HMP, while the brain sample of a treated (stressed or drug-administered) rat was derivatized with d-HMP. The two derivatives were mixed and then subjected to LC/ESI-MS/MS. The stress- and drug (clozapine and fluoxetine)-evoked increases in the brain AP and PREG levels were accurately analyzed by the developed method. It was also possible to determine the absolute concentrations of the brain steroids when a deuterium-coded moiety was introduced to the standard steroids of known amounts by the derivatization and the resulting derivatives were used as internal standards. The HMP-derivatization enabled the highly sensitive detection and the use of d-HMP significantly improved the assay precision [the intra- (n=5) and inter-assay (n=5) relative standard deviations did not exceed 13.7%] and accuracy (analytical recovery ranged from 98.7 to 106.7%).

MATERIALIEN
Produktnummer
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Produktbeschreibung

Sigma-Aldrich
Salzsäure, ACS reagent, 37%
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Sigma-Aldrich
Methanol, ACS reagent, ≥99.8%
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Sigma-Aldrich
Essigsäure, glacial, ACS reagent, ≥99.7%
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Sigma-Aldrich
Natriumhydroxid, ACS reagent, ≥97.0%, pellets
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Essigsäure, glacial, ReagentPlus®, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Salzsäure, ACS reagent, 37%
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Sigma-Aldrich
Natriumhydroxid, reagent grade, ≥98%, pellets (anhydrous)
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Sigma-Aldrich
Natronlauge, 50% in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorwasserstoff -Lösung, 4.0 M in dioxane
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Sigma-Aldrich
Natronlauge, BioUltra, for molecular biology, 10 M in H2O
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Natriumchlorid, for molecular biology, DNase, RNase, and protease, none detected, ≥99% (titration)
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Sigma-Aldrich
Salzsäure -Lösung, 1.0 N, BioReagent, suitable for cell culture
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Essigsäure, glacial, ≥99.99% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Natriumhydroxid, BioXtra, ≥98% (acidimetric), pellets (anhydrous)
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Natriumhydroxid, puriss., meets analytical specification of Ph. Eur., BP, NF, E524, 98-100.5%, pellets
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Sigma-Aldrich
Natronlauge, 1.0 N, BioReagent, suitable for cell culture
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Natriumchlorid -Lösung, 0.9% in water, BioXtra, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Salzsäure, meets analytical specification of Ph. Eur., BP, NF, fuming, 36.5-38%
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Sigma-Aldrich
Essigsäure -Lösung, suitable for HPLC
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Sigma-Aldrich
Natriumchlorid, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Natriumchlorid -Lösung, 5 M in H2O, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Salzsäure, 37 wt. % in H2O, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Natriumhydroxid, reagent grade, 97%, powder
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Sigma-Aldrich
Salzsäure, 36.5-38.0%, BioReagent, for molecular biology
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Sigma-Aldrich
Chlorwasserstoff -Lösung, 2.0 M in diethyl ether
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Sigma-Aldrich
Methanol, Laboratory Reagent, ≥99.6%
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Sigma-Aldrich
Natriumhydroxid, pellets, semiconductor grade, 99.99% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Trifluormethansulfonsäureanhydrid, 99%
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SAFC
Natriumchlorid -Lösung, 5 M
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Supelco
Salzsäure -Lösung, volumetric, 0.1 M HCl (0.1N), endotoxin free
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