E3132

E-64

protease inhibitor

• Synonym(e): trans-Epoxysuccinyl-L-leucylamido(4-guanidino)butan, L-trans-3-Carboxyoxiran-2-carbonyl-L-leucylagmatin, N-(trans-Epoxysuccinyl)-L-leucin-4-guanidinobutylamid
• Empirische Formel (Hill-System): C₁₅H₂₇N₅O₅
• CAS-Nummer: 66701-25-5
• Molekulargewicht: 357.41
• Beilstein: 1405664
• MDL-Nummer: MFCD00080261
• UNSPSC-Code: 12352202
• PubChem Substanz-ID: 24278411
• NACRES: NA.77

Eigenschaften

• Biologische Quelle: synthetic (organic)
• Qualitätsniveau: 300
• Assay: ≥98% (HPLC)
• Form: powder
• Löslichkeit: water: 20 mg/mL, clear, colorless to faintly yellow
• Lagertemp.: 2-8°C
• SMILES String: CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H]1O[C@H]1C(O)=O)C(=O)NCCCCNC(N)=N
• InChI: 1S/C15H27N5O5/c1-8(2)7-9(20-13(22)10-11(25-10)14(23)24)12(21)18-5-3-4-6-19-15(16)17/h8-11H,3-7H2,1-2H3,(H,18,21)(H,20,22)(H,23,24)(H4,16,17,19)/t9-,10+,11+/m0/s1
• InChIKey: LTLYEAJONXGNFG-HBNTYKKESA-N

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

E-64 ist ein Cysteinproteasehemmer, der aus dem Schimmelpilz Aspergillus japonicus TPR-64 isoliert wurde. E-64 ist auch als N-[N-(L-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-leucyl]-agmatin bekannt. E-64 kann effektiv verschiedene Cysteinproteasen hemmen, insbesondere:

• Cathepsin K
• Cathepsin L
• Cathepsin S

E-64 wirkt auch gegen andere Enzyme, beispielsweise:

• Calpain
• Cathepsin B
• Cathepsin H
• Papain

Anwendung

E-64 ist ein wirkungsvoller Ligand zur Affinitätsaufreinigung von Cysteinproteasen. Durch Kopplung mit einer thiolierten Affinitätsmatrix ist die Bindung nicht mehr irreversibel, die Spezifität wird aber beibehalten.

Biochem./physiol. Wirkung

E-64 ist ein irreversibler, wirksamer und hochspezifischer Cysteinproteaseninhibitor. E-64 reagiert nicht mit der funktionellen Thiol-Gruppe der Nichtproteaseenzyme wie z. B. L-Lactatdehydrogenase oder Kreatinkinase. Im Gegensatz zu anderen Cysteinproteaseninhibitoren wie beispielsweise Leupeptin und Antipain werden Serinproteasen (außer Trypsin) nicht von E-64 gehemmt. Die Trans-Epoxysuccinyl-Gruppe (aktive Gruppe) von E-64 bindet irreversibel an die aktive Thiol-Gruppe von vielen Cysteinproteasen wie beispielsweise Papain, Actinidase und Cathepsin B, H und L, um eine Thioether-Bindung einzugehen. E-64 ist ein sehr nützlicher Cysteinproteaseninhibitor für die Anwendung in In-vivo-Studien, weil es eine spezifische Hemmung, eine gute Zell- und Gewebepermeabilität und eine geringe Toxizität aufweist.

Angaben zur Herstellung

E-64 ist in Wasser löslich. Eine Lösung von 20 mg/mL kann in Wasser zubereitet werden (Erwärmung evtl. erforderlich). Eine empfohlene Stammlösung ist eine wässrige 1-mM-Lösung. Die effektive Konzentration für die Verwendung als Proteasehemmer beträgt 1 bis 10 μM. Wässrige Stammlösungen sind bei -20 °C monatelang stabil. Verdünnte Lösungen sind bei einem neutralen pH-Wert tagelang stabil. E-64 ist von pH 2 bis 10 stabil, in Ammoniak oder HCl aber unstabil. E-64 ist auch in DMSO löslich; eine 10-mM-Lösung kann in trockenem DMSO hergestellt und bei -20 °C aufbewahrt werden. Darauffolgende Verdünnungen erfolgten in Kulturmedium. Injektionslösungen werden durch Auflösen von E-64 in 0,9 % Natriumchlorid oder in einer Mindestmenge an gesättigtem Natriumbicarbonat mit anschließender Verdünnung mit 0,9% Natriumchlorid zubereitet (nach Anpassen des pH-Werts auf 7,0 mithilfe von Essigsäure).

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)