FSTMPMMRO

FastStart TaqMan^® Probe Master

sufficient for 100 reactions, sufficient for 500 reactions, sufficient for 2000 reactions, suitable for qPCR, suitable for RT-qPCR

• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 100 reactions; sufficient for 2000 reactions; sufficient for 500 reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Leistungsmerkmale: dNTPs included: no; hotstart
• Hersteller/Markenname: Roche
• Verpackung: pkg of 100 x 50 μL reactions (04673409001); pkg of 2000 x 50 μL reactions (04673433001); pkg of 500 x 50 μL reactions (04673417001)
• Methode(n): RT-qPCR: suitable; qPCR: suitable
• Aufnahme: purified DNA
• Nachweisverfahren: probe-based

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

FastStart TaqMan^® Probe Master ist ein gebrauchsfertiges Heißstart-Reaktionsgemisch ohne ROX für qPCR (quantitative Polymerase-Kettenreaktion) und RT-qPCR (Reverse Transkriptase-qPCR) auf Echtzeit-PCR-Systemen mit Ausnahme der LightCycler^®-Instrumente. Es ist ein 2-fach konzentrierter Mastermix, der alle Reagenzien enthält (außer Primer, Sonde und Template). Dieser Mastermix vereinfacht die Vorbereitung von Reaktionen für die DNA-Detektion und -Analyse. Er ermöglicht eine empfindliche Detektion und Quantifizierung definierter DNA-Sequenzen.
Heißstart-Protokolle verbessern die Spezifität und Ausbeute der PCR erheblich. Hitzelabile Blockiergruppen auf einigen der Aminosäurereste der FastStart Taq-DNA-Polymerase inaktivieren das modifizierte Enzym bei Raumtemperatur. Daher findet während der Zeit, in der Primer unspezifisch binden können, keine Verlängerung statt. Die FastStart Taq-DNA-Polymerase wird durch Entfernung der Blockiergruppen bei hohen Temperaturen (z. B. einem Vorinkubationsschritt bei +95 °C) aktiviert.
Dieser FastStart TaqMan^® Probe Master kann zur Amplifikation und Detektion jedes DNA- oder cDNA-Targets, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets, verwendet werden. Allerdings wäre es nötig, das Detektionsprotokoll an die Reaktionsbedingungen des jeweils verwendeten Echtzeit-PCR-Geräts anzupassen und für jedes Target designspezifische Hydrolysesonden und Primer zu nutzen.
Durch Kombination dieses Mastermixes mit unserem Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit erzielen Sie ausgezeichnete Ergebnisse bei der zweistufigen qRT-PCR.

Heißstart-Protokolle verbessern die Spezifität, Sensitivität und Ausbeute der PCR erheblich. Hitzelabile Blockiergruppen auf einigen der Aminosäurereste der FastStart Taq-DNA-Polymerase inaktivieren das modifizierte Enzym bei Raumtemperatur. Daher findet während der Zeit, in der Primer unspezifisch binden können, keine Verlängerung statt. Die FastStart Taq-DNA-Polymerase wird durch Entfernung der Blockiergruppen bei hohen Temperaturen (z. B. einem Vorinkubationsschritt bei +95 °C) aktiviert.

Anwendung

FastStart TaqMan^® Probe Master wurde verwendet in:

• quantitativen Echtzeit-DNA-Detektionsassays
• qPCR und der zweistufigen Umkehrtranskription (RT)-qPCR
• im Detektionsformat von Hydrolysesonden

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Steigerung der qPCR-Sensitivität und -Spezifität.

Erzeugung niedrigerer Grenzwerte (C_t) mit dem Heißstart-Enzym FastStart Taq DNA Polymerase und den im Master-Mix enthaltenen ultrareinen Nukleotiden.

• Mit einem sondenbasierten Assay verwendbar:

Erreichen empfindlicher, spezifischer Ergebnisse in Assays mit den Universal ProbeLibrary-Sonden oder jeder anderen Hydrolyse-Sonde.

• Amplifikation und Detektion zahlreicher DNA- und cDNA-Targets:

Amplifiziert Fragmente bis zu einer Länge von 500 Basenpaaren, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets.

• Funktioniert mit allen Echtzeit-PCR-Geräten mit Ausnahme der LightCycler^®-Instrumente:

Erhältlich in zwei Formulierungen – eine Version mit dem ROX Referenzfarbstoff und eine ohne ROX.

• Visualisierung von Amplifikationsprodukten auf Agarosegelen.

• Verwenden von automatisierten Pipettierstationen zum Vorbereiten von qPCR-Reaktionen.

Verwendung eines Master-Mix, der bei Raumtemperatur während längerer Reaktionseinrichtzeiten stabil ist.

• Keine Verschleppung von Kontaminationen.

Das Gemisch enthält dUTP und kann so mit Uracil-DNA-Glycosylase verwendet werden, um falschpositive Ergebnisse aufgrund einer Verschleppung von Kontaminationen (z. B. Kontamination mit amplifizierter DNA) auszuschließen.

Komponenten

FastStart TaqMan^® Probe Master, 2-fach konzentrierter Mastermix aus FastStart Taq-DNA-Polymerase, Reaktionspuffer, Nukleotiden (dATP, dCTP, dGTP, dUTP).

Qualität

Funktionstest: Jede Charge wird unter Anwendung von drei Templates – einem GC-reichen, einem AT-reichen und einem langen (etwa 440 Basenpaare) Template – einer qPCR-Leistungsprüfung unterzogen.

Sonstige Hinweise

qPCR-Targets
Grundsätzlich kann FastStart TaqMan^® Probe Master zur Amplifikation und Detektion jedes DNA- oder cDNA-Targets, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets, verwendet werden. Allerdings wäre für jedes Target erforderlich:

• Anpassung des Detektionsprotokolls an die Reaktionsbedingungen des Echtzeit-PCR-Geräts, und
• designspezifische PCR-Primer und Hydrolysesonden für das Target.

Allgemeine Empfehlungen entnehmen Sie dem Bedienerhandbuch Ihres Echtzeit-PCR-Geräts.
Zwei Versionen erhältlich
Der Mastermix ist in zwei Versionen erhältlich – eine Version mit dem ROX-Referenzfarbstoff und eine ohne ROX.
Vermeiden von Verschleppungskontaminationen
Dieses Master enthält dUTP, das in PCR-Produkte integriert wird und so dazu beiträgt, falsch positive Ergebnisse infolge von Verschleppungskontaminationen zu verhindern. In nachfolgenden PCRs können Sie Uracil-DNA-Glycosylase hinzufügen, um jegliche Uracil-haltigen Verschleppungskontaminationen (Amplifikationsprodukte aus früheren PCRs) abzubauen.
qRT-PCR
Bei Kombination dieses Mastermixes mit unserem Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit können Sie eine zweistufige qRT-PCR durchführen. Das Kit erzielt hervorragende Ergebnisse und arbeitet effizient mit allen Echtzeit-PCR-Geräten.

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Rechtliche Hinweise

LightCycler is a registered trademark of Roche

TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash