11468120910
Roche
Reverse Transcriptase Assay, kolorimetrisch
suitable for enzyme immunoassay, kit of 1 (14 components), sufficient for ≤200 tests
Synonym(e):
RT-PCR
Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise
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About This Item
UNSPSC-Code:
41105333
Empfohlene Produkte
Verwendung
sufficient for ≤200 tests
Qualitätsniveau
Verpackung
kit of 1 (14 components)
Hersteller/Markenname
Roche
Methode(n)
enzyme immunoassay: suitable
Lagertemp.
−20°C
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Allgemeine Beschreibung
Kolorimetrisches Enzym-Immunoassay für den quantitativen Nachweis der retroviralen reversen Transkriptase-Aktivität durch das Einsetzen von Digoxigenin- und Biotin-markiertem dUTP in die DNA.
Anwendung
Das Reverse-Transkriptase-Assay wurde für den quantitativen Nachweis der RT-Aktivität in Zellkultur- und anderen biologischen Proben entwickelt. Das Assay wird zum Nachweis der Vermehrung von Retroviren in mit Retroviren infizierten Säugerzellen in Kulturen verwendet. Das Assay wird auch für das In-vitro-Screening auf RT-Inhibitoren verwendet.
Verpackung
1 Kit mit 14 Komponenten.
Spezifikationen
Assays für reverse Transkriptase (RT)-Aktivität werden vielfach für Tests der Retroviren-Vermehrung in vitro angewandt. RT ist für die frühe provirale DNA-Synthese erforderlich und somit ein Hauptziel der antiretroviralen Therapie, beispielsweise im Falle des akquirierten Immundefizienz-Syndroms (AIDS). Reverse Transkriptase verwendet im Allgemeinen mit verschiedenen Primern komplexierte RNA als Template für die DNA-Synthese. Das klassische Verfahren zur Detektion oder Quantifizierung von RT-Aktivität sieht die Messung der Menge der integrierten markierten Nukleotide vor.
Testzeit: Ca. 4 Stunden (für eine Enzymreaktion von 1 Stunde), ca. 18 Stunden (für eine Enzymreaktion von 15 Stunden).
Probenmaterial: Zellkulturüberstand und andere biologische Proben, RT-Inhibitoren.
Sensitivität: Das Reverse-Transkriptase-Assay weist 20pg HIV-1 reverse Transkriptase in einer 1-stündigen Reaktion nach. 1 pg kann in einer Reaktion über Nacht nachgewiesen werden.
Testzeit: Ca. 4 Stunden (für eine Enzymreaktion von 1 Stunde), ca. 18 Stunden (für eine Enzymreaktion von 15 Stunden).
Probenmaterial: Zellkulturüberstand und andere biologische Proben, RT-Inhibitoren.
Sensitivität: Das Reverse-Transkriptase-Assay weist 20pg HIV-1 reverse Transkriptase in einer 1-stündigen Reaktion nach. 1 pg kann in einer Reaktion über Nacht nachgewiesen werden.
Das Assay weist die Aktivität von natürlicher oder rekombinanter retroviraler reverser Transkriptase nach, u. a. von HIV-1, HIV-2, SIV-1, AMV und M-MulV.
Prinzip
Das kolorimetrische Reverse-Transkriptase-Assay nutzt die Fähigkeit der reversen Transkriptase zum Synthetisieren der DNA mit dem hybriden Polymer (A) x Oligo (dT)15 als Template und Primer. Es vermeidet den Gebrauch von [3H]- oder [32P]-markierten Nukleotiden, die bei standardmäßigen RT-Assays zum Einsatz kommen. Anstelle von radiomarkierten Nukleotiden werden Digoxigenin- und Biotin-markierte Nukleotide in einem optimierten Verhältnis durch die RT-Aktivität in dasselbe DNA-Molekül integriert. Es wird zwar ein Template/Primer-Hybrid bereitgestellt, doch dank der Flexibilität des Assays kann jedes gewünschte Template (z. B. ein virales Template) verwendet werden. Die Detektion und Quantifizierung der synthetisierten DNA als Parameter für die RT-Aktivität folgen einem Sandwich-ELISA-Protokoll: biotinmarkierte DNA bindet an die Oberfläche von mit Streptavidin beschichteten Mikrotiterplatten-Modulen. Im nächsten Schritt wird ein Antikörper gegen an Peroxidase konjugiertes Digoxigenin (anti-DIG-POD) hinzugegeben und an die digoxigeninmarkierten Nukleotide (gemäß einer Lizenz des Institute Pasteur) gebunden. Beim letzten Schritt wird das Peroxidasesubstrat ABTS hinzugefügt. Das Peroxidase-Enzym katalysiert die Spaltung des Substrats, um ein gefärbtes Reaktionsprodukt zu erzeugen. Die Extinktion der Proben wird mit einem Mikrotiterplatten (ELISA)-Lesegerät nachgewiesen und seht in einem direkten Bezug zum Ausmaß der RT-Aktivität in der Probe.
Sonstige Hinweise
Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.
Nur Kit-Komponenten
Produkt-Nr.
Beschreibung
- HIV-1 Reverse Transcriptase
- Incubation Buffer
- Nucleotides
- Template/Primer Hybrid
- Lysis Buffer
- Anti-Digoxigenin-POD antibody
- Washing Buffer Concentrate 10x concentrated
- Conjugate Dilution Buffer
- Substrate Buffer
- ABTS Substrate
- Substrate Enhancer
- Microplate Modules, precoated with streptavidin
- One Strip Frame (for 8-well microplate modules)
- Cover Foils for Microplates
Alle anzeigen (14)
Signalwort
Danger
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Skin Sens. 1
Lagerklassenschlüssel
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 2
Flammpunkt (°F)
does not flashNot applicable
Flammpunkt (°C)
does not flashNot applicable
Analysenzertifikate (COA)
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