MAB1012
Anti-Alkalische-Phosphatase-Antikörper, E. coli, nur bakteriell
ascites fluid, Chemicon®
Synonym(e):
AP, Alk. Phos.
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About This Item
UNSPSC-Code:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41
Empfohlene Produkte
Biologische Quelle
mouse
Qualitätsniveau
Antikörperform
ascites fluid
Antikörper-Produkttyp
primary antibodies
Klon
monoclonal
Speziesreaktivität
E. coli
Hersteller/Markenname
Chemicon®
Methode(n)
immunocytochemistry: suitable
immunoprecipitation (IP): suitable
western blot: suitable
Isotyp
IgG2a
UniProt-Hinterlegungsnummer
Versandbedingung
dry ice
Posttranslationale Modifikation Target
unmodified
Angaben zum Gen
Escherichia coli ... PhoA(945041)
Spezifität
Alkalische Phosphatase (AP). MAB1012 hat eine hohe Affinität und erkennt mittels SDS-PAGE eine AP-Determinante, die gegen Denaturierung resistent ist. Er eignet sich daher ideal für den empfindlichen und spezifischen Nachweis von AP-Fusionsproteinen durch Western-Blot-Analysen von E.-coli-Transformanten, die Fusionsprodukte exprimieren.
Immunogen
Epitop: E. coli, nur bakteriell
F201C1B
Anwendung
Der Anti-Alkalische Phosphatase-Antikörper, E. coli, nur bakteriell, weist den Gehalt an alkalischer Phosphatase nach und wurde für die Verwendung in IP, WB und IC publiziert und validiert.
Western Blot mit 1:5.000. 42–45 kDa auf SDS-PAGE, reduzierende Gele für natürliches Monomer der alkalischen Phosphatase von E. coli. Fusionsproteine der alkalischen Phosphatase variieren in Abhängigkeit vom Ziel-Fusionsprotein.
Immunzytochemie: Reagiert mit E.-coli.- AP-Ziel-Fusionsprotein in acetonfixierten Zellpräparaten. 1:4000, andere Fixiermittel oder Bedingungen nicht getestet.
ASSAY:
Herstellung von E.-coli-TnphoA-Transformanten: Der E.-coli-Stamm CC118 wurde mit dem Plasmid pGEM-3Z transformiert, das TnphoA-Insertionsmutationen im P101-Gen von Mycoplasma hyorhinis enthält, das für ein Protein mit einem typischen N-terminalen prokaryotischen Einzelpeptid kodiert (Yogev et al. 1991).
Identifikation von Fusionsproteinen mit MAB1012-Transformanten: Die Transformanten werden in 2XYT-Medium bis OD600 = 0,6 kultiviert. Die Zellen wurden 3 Minuten lang bei 10.000 x g zentrifugiert, in SDS-PAGE-Probenpuffer suspendiert, 5 Minuten lang bei 100 °C erhitzt, eingefroren und aufgetaut und wie oben beschrieben bei Raumtemperatur zentrifugiert, um unlösliches Material zu entfernen. Die Probe wird auf ein 9%iges SDS-PAGE-Gel aufgetragen und der Western-Immunblot wird wie beschrieben durchgeführt (Yogev et al. 1991).
Immunpräzipitation: 5μl Antikörper pro 500μl Lysat in RIPA- oder 0,5%igen Triton-X-100-Lösungen.
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.
Immunzytochemie: Reagiert mit E.-coli.- AP-Ziel-Fusionsprotein in acetonfixierten Zellpräparaten. 1:4000, andere Fixiermittel oder Bedingungen nicht getestet.
ASSAY:
Herstellung von E.-coli-TnphoA-Transformanten: Der E.-coli-Stamm CC118 wurde mit dem Plasmid pGEM-3Z transformiert, das TnphoA-Insertionsmutationen im P101-Gen von Mycoplasma hyorhinis enthält, das für ein Protein mit einem typischen N-terminalen prokaryotischen Einzelpeptid kodiert (Yogev et al. 1991).
Identifikation von Fusionsproteinen mit MAB1012-Transformanten: Die Transformanten werden in 2XYT-Medium bis OD600 = 0,6 kultiviert. Die Zellen wurden 3 Minuten lang bei 10.000 x g zentrifugiert, in SDS-PAGE-Probenpuffer suspendiert, 5 Minuten lang bei 100 °C erhitzt, eingefroren und aufgetaut und wie oben beschrieben bei Raumtemperatur zentrifugiert, um unlösliches Material zu entfernen. Die Probe wird auf ein 9%iges SDS-PAGE-Gel aufgetragen und der Western-Immunblot wird wie beschrieben durchgeführt (Yogev et al. 1991).
Immunpräzipitation: 5μl Antikörper pro 500μl Lysat in RIPA- oder 0,5%igen Triton-X-100-Lösungen.
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.
Physikalische Form
Aszites. Enthält keine Konservierungsmittel.
Rechtliche Hinweise
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
WGK
WGK 1
Flammpunkt (°F)
Not applicable
Flammpunkt (°C)
Not applicable
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