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ChIPAb+-Trimethyl-Histon H3 (Lys9) - durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

from rabbit

• Synonym(e): H3K9me3, Histone H3 (tri methyl K9), Histone H3K9me3
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit
• Qualitätsniveau: 100
• Klon: polyclonal
• Speziesreaktivität: human, mouse, vertebrates
• Hersteller/Markenname: ChIPAb+; Upstate^®
• Methode(n): ChIP: suitable; dot blot: suitable; western blot: suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_003484
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q16695
• Versandbedingung: dry ice
• Angaben zum Gen: human ... H3F3B(3021)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen. Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das ChIPAb+-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Set enthält den Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper, einen Negativkontrolle-Antikörper (aufgereinigtes Kaninchen-IgG) und qPCR-Primer, die eine 117-bp-Region innerhalb des 3’-Endes des humanen ZNF554-Gens amplifizieren. Das Trimethyl-Histon H3 (Lys9) und die Negativkontrolle-Antikörper werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

Die Methylierung von Histonen kann an zwei verschiedenen Resten erfolgen: Arginin oder Lysin. Die Histon-Methylierung kann, abhängig vom methylierten Rest, mit einer Transkriptionsaktivierung oder -unterdrückung in Zusammenhang stehen. Lysin 9 von Histon H3 kann durch verschiedene Histon-Methyltransferasen (HMT) wie SuvH39H1 oder G9a mono-, di- oder trimethyliert werden. Dieses methylierte Lysin kann durch Histon-Demethylasen wie JMJD1A, LSD1 oder JMJD2C demethyliert werden. Die Methylierung dieses Rests ist primär mit der Transkriptionsunterdrückung assoziiert.

Spezifität

Die Immunogensequenz ist bei einem breiten Spektrum von Tier- und Pflanzenspezies identisch, weshalb eine weitreichende Kreuzreaktivität erwartet wird.

Erkennt Histon H3, Molekülmasse 17 kDa, an Lysin 9 trimethyliert.

Immunogen

Der aufgereinigte Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper wurde gegen an BSA konjugiertes, synthetisches Peptid, das die Sequenz …AR[me3K]S… enthält, wobei me3K dem Trimethyl-Lysin 9 von humanem Histon H3 entspricht, entwickelt.

Anwendung

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin, das aus 2 x 10⁶ HeLa-Zellen hergestellt wurde, wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μg aufgereinigtem Antikörper oder normalem Kaninchen-IgG und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen.
Die erfolgreiche Anreicherung von mit Trimethyl-Histon H3 (Lys9) assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für GAPDH, die den humanen GAPDH-Promotor flankieren, und Primern, die auf den Promotor von humanem MyoD abzielen, verifiziert.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf die Protokolle für das EZ-Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP Kit (Katalognr. 17-371).

Western-Blot-Analyse:
Rekombinantes Histon H3 (Bahn 1) und HeLa-Säureextrakte (Bahn 2) wurden durch Elektrophorese aufgelöst, auf Nitrocellulose übertragen und mit Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys9) (1 μg/ml) geprüft. Die Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem veranschaulicht (siehe Abbildungen).

Beadlyte Histon-Peptid-Spezifitätsassay:
0,5 μg/ml aufgereinigter Anti-Dimethy-Histon H3 (Lys9) wurde mit einem an Histon H3-Peptide mit folgenden Modifikationen konjugierten Mikrosphären-Cocktail inkubiert:
1. Trimethyl-Lysin 9
2. Dimethyl-Lysin 9
3. Monomethyl-Lysin 9
4. Nichtmodifiziertes H3
Der ungebundene Antikörper wurde anschließend durch Filtration entfernt. Peptid-Antikörper-Komplexe wurden mit einem an PE konjugierten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper inkubiert. Die Fluoreszenz wurde auf einem Luminex 100-Instrument gemessen. Die mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) wird grafisch dargestellt.

Durch ChIP validiertes Trimethyl-Histon H3 (Lys9)-Antikörper- und Primer-Set, einschließlich Antikörper in ChIP-Qualität und spezifische Kontroll-PCR-Primer für die Chromatin-Immunpräzipitation von H3K9Me3.

Komponenten

Polyklonaler Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper, 1 Fläschchen

ZNF554-Primer-Set, 1 Fläschchen

Qualität

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus 3 x 10⁶ NIH/3T3-L1-Zellen wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 4 µg normalem Kaninchen-IgG oder Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen. Die erfolgreiche Anreicherung von mit Acetyl-Histon-H3(Lys9) assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für ZNF554 verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für EZ-Magna A ChIP (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).

Zielbeschreibung

17 kDa

Physikalische Form

Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys9) (polyklonales Kaninchen-IgG). Ein Fläschchen mit 100 μg mit Protein A aufgereinigtem IgG in 100 μl 0,02-mol/l-Phosphatpuffer, pH-Wert 7,4, 0,25 mol/l NaCl mit 0,05 % Natriumazid und 30 % Glycerin. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Kaninchen-IgG. Ein Fläschchen mit 125 μg normalem Kaninchen-IgG in 125 μl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

ChIP-Primer, ZNF554. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für ZNF554. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: CGG GGA AAA GCC CTA TAA AT
REV: TCC ACA TTC ACT GCA TTC GT

Format: Aufgereinigt

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
Einschließlich Kaninchen-IgG-Antikörper als Negativkontrolle und für ZNF554 spezifische Kontrollprimer.

Rechtliche Hinweise

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids