억제제 준비에 관한 자주 묻는 질문(FAQ)
적절한 억제제 준비는 저분자 실험의 성공을 위한 핵심 요소입니다. 용매에서 억제제를 재구성할 때는 단기 및 장기 보관과 안정성을 고려해야 합니다. 일부 억제제는 수용액에서 빠르게 효력을 잃을 수 있습니다. 일반적으로 모든 유기분자가 그런 것은 아니지만, 대부분의 유기분자는 다이메틸설폭사이드(DMSO)에 용해하여 보관할 수 있습니다. 그러나 자세한 내용은 항상 제품 데이터 시트를 확인하거나 당사의 기술 서비스 연구자에게 문의하세요.
다음은 억제제 준비 관련 고려 사항에 관한 자주 묻는 질문(FAQ)입니다.
화합물을 용해하는 데 가장 적합한 용매는 어떤 종류인가요?
생물학적 실험에서는 물이 가장 선호되는 용매입니다. 그러나 몇몇 유기 화합물은 물에 녹지 않거나 수분이 있으면 빠르게 분해됩니다. DMSO가 권장 용매인 경우, 수분이 전혀 없는 새 DMSO 원액을 사용하는 것이 가장 좋습니다. 오염된 수분은 해당 화합물의 분해를 가속화하거나 불용성으로 만들 수 있습니다.
버퍼에서 직접 DMSO 원액을 연속 희석할 수 없는 이유는 무엇인가요?
경우에 따라서는 이것이 문제가 되지 않을 수도 있습니다. 그러나 대부분의 경우 유기 물질은 용액에서 침전됩니다. 초기 연속 희석은 DMSO로만 한 다음 최종 희석된 시료를 버퍼 또는 배양 배지에 추가하는 것이 가장 좋습니다. 화합물은 작업 농도에서만 수성 매질에 용해될 수도 있습니다.
DMSO의 억제제가 수성 매질에서 침전되는 것을 방지하려면 어떻게 해야 하나요?
DMSO에 용해된 일부 유기 제품은 버퍼나 세포 배양 배지와 같은 수용액에 직접 첨가할 경우 용액에서 분리될 수 있습니다. 이를 방지하려면 농축 원액을 수성 매질에 추가하기 전에 DMSO로 더 희석하세요. 대부분의 세포는 최대 0.1%의 최종 DMSO 농도까지 견딜 수 있습니다. 물론 실험에는 DMSO만을 사용한 대조군도 항상 포함되어야 합니다.
펩타이드를 가용화할 때 어떤 사전 조치를 취해야 하나요?
대부분의 펩타이드는 -20°C에서 보관하면 몇 년 동안 안정적으로 유지됩니다. 펩타이드를 사용할 준비가 되면 먼저 바이알을 건조기에 실온으로 둡니다. 시스테인, 메티오닌, 트립토판이 함유된 펩타이드는 산화 방지를 위해 특별한 주의가 필요할 수 있습니다.
펩타이드는 증류수, 희석 아세트산 또는 기타 적절한 용매에 용해시켜 단단히 밀봉된 병에 보관해야 합니다. 대부분의 펩타이드는 용액 내 수명이 제한되어 있으므로 장기간 보관하는 것은 피해야 합니다. 버퍼나 식염수는 펩타이드가 용액에 완전히 녹은 후에만 첨가해야 합니다. 완전히 용해할 수 없는 경우, 용액을 약하게 초음파 처리할 수 있습니다.
용액은 분주하여 -20°C, 5~7 pH 범위에서 보관해야 합니다. 해동하였으나 사용하지 않은 희석액 분량은 폐기해야 합니다.
펩타이드 계량 시 어떤 사전 조치를 취해야 하나요?
펩타이드 농도를 정확하고 빠르게 측정하는 것은 어려울 수 있습니다. 펩타이드 계량에 가장 일반적으로 사용되는 방법은 동결된 파우더의 중량, 자외선(UV) 흡광도 또는 아미노산 분석에 의존합니다. 동결된 펩타이드의 중량을 기준으로 펩타이드 농도를 설정하는 것은 분석된 파우더에 상당량(10~70%)의 결합된 수분, 염 또는 반대이온이 포함될 수 있기 때문에 대부분의 경우 부정확합니다.
또 다른 펩타이드 계량 방법은 280 nm에서의 흡광도에 의존하므로 트립토판과 티로신 잔기가 서열에 존재하는 경우에만 펩타이드 농도를 추정하는 데 사용할 수 있습니다. 따라서 280 nm에서 빛을 흡수하는 아미노산을 포함하지 않는 펩타이드는 이 방법을 사용하여 정확하게 정량화할 수 없습니다. 205 nm에서 흡광도를 측정하여 펩타이드 농도를 측정할 수는 있지만, 많은 용매 및 기타 화학 물질이 이 파장에서 빛을 흡수하기 때문에 이 측정은 시료 구성의 변화에 훨씬 더 민감합니다.
마지막으로 펩타이드 계량의 황금 기준으로 인정받는 아미노산 분석으로 아마도 가장 정확하게 펩타이드를 계량할 수 있지만, 비용이 많이 들고 특수 장비와 함께 시료 조작에 많은 시간이 소요됩니다.
바이알에 '냉장 보관' 또는 '냉동 보관'으로 표시되어 있는데 일부 저분자는 실온에서 배송되는 이유는 무엇인가요?
제품의 장기적인 안정성을 위해 냉장고나 냉동고에 보관하는 것을 권장합니다. 재료가 상온에서 배송되는 경우 배송 및 정상적인 취급 기간 동안 안정적인 것으로 간주되는 것입니다. 제품이 도착하면 라벨에 표시된 대로 냉장고나 냉동실에 보관하세요.
분광광도법으로 측정하여 농도를 계산하려면 어떻게 해야 하나요?
용액에서 분자의 정확한 농도를 파악하는 것이 중요한 경우가 있습니다. 다음 예는 농도뿐만 아니라 분자의 순도를 파악하는 데에도 도움이 됩니다.
흡광도와 농도의 관계는 비어의 법칙에 의해 주어지며, 여기서 A = abc이되,
- A = 흡광도
- a = 흡수율로 정의된 비례 상수
- b = 빛의 경로(cm)
- c = 흡수 화합물의 농도
b가 1 cm이고 c가 몰/리터로 표시될 때, 기호 a는 기호 ε(엡실론)로 대체됩니다. ε는 규정된 용매, 온도 및 pH 조건하에서, 주어진 파장에서의 주어진 화합물에 대한 상수이며 몰 흡광계수라고 합니다. ε는 화합물의 성격을 정의하고 순도를 설정하는 데에도 사용됩니다.
계산의 예시
25°C에서 클로로포름에 용해된 빌리루빈(분자량 = 584)의 몰 흡광계수(ε)는 60,700입니다.
따라서 1 cm 큐벳에서 분석된 100% 순수 빌리루빈 5 mg/L(0.005 g/L)의 흡광도는 A = (60,700)(1)(0.005/584) = 0.52{A = abc}가 되어야 합니다.
따라서 흡광도가 0.49인 5 mg/mL 용액은 순도 94%(0.49/0.52 x 100)가 되어야 합니다.
대부분의 생화학 및 독성학 연구에서는 mol/L이 아닌 g/dL 단위의 농도를 기준으로 상수를 나열하는 것이 일반적입니다. 이는 물질의 분자량을 정밀하게 알 수 없는 경우에도 흔히 발생합니다.
여기서 b = 1 cm, c = 1 g/dL(1%)이고, A는 A1% cm)로 표시됩니다. 이 상수를 흡수 계수라고 합니다.
흡광도와 농도 사이의 직접적인 비례성은 지정된 조건에서 주어진 기기에 대해 실험적으로 확립되어야 합니다. 특정 농도까지 선형 관계인 경우가 많습니다. 이러한 제한사항 내에서 보정 상수(K)는 다음과 같이 도출할 수 있습니다: A = abc.
따라서 c = A/ab = A x 1/ab입니다. 주어진 분석 방법에서 흡수율(a)과 빛의 경로(b)는 일정하게 유지됩니다. 따라서 1/ab는 상수(K)로 대체할 수 있습니다. 그러면 c = A x K이므로 K = c/A가 됩니다. 따라서 상수 K의 값은 알려진 농도(c)의 표준 흡광도(A)를 측정하여 구할 수 있습니다.
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