CAS9GFPP

CMV-CAS9-2A-GFP プラスミド

• 別名: Cas9プラスミド
• UNSPSCコード: 41106610
• NACRES: NA.51

特性

• リコンビナント: expressed in E. coli
• 品質水準: 200
• 包装: vial of 50 μL
• 濃度: 20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)
• プロモーター: Promoter name: CMV
• レポーター遺伝子: GFP
• セレクション: kanamycin
• 輸送温度: dry ice
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

Cas9発現プラスミドは、Cas9の強力な一過性発現のためにCMVプロモーターを使用します。代替プロモーターは、MluIおよびNheIを使用したCMVによって置き換えることができます。また、Cas9発現プラスミドは、T7ベースのmRNA生産のためにXbaIを用いて線形化できます。Cas9ヌクレアーゼと共に発現する蛍光色素分子の追加により、トランスフェクションの成功を簡単に視覚化できます。

アプリケーション

CMV-CAS9-2A-GFPプラスミドは、ヒトU937白血病細胞にadditional sex combs-like1変異を導入するために使用されます。また、CRISPR/Cas9分析にも使用されます。
CMV-CAS9-2A-GFPプラスミドは、次の目的で行う機能的ゲノム/標的バリデーションに適しています。

• 複数の細胞株における遺伝子ノックアウトの作製
• RNAiに適さない遺伝子の完全なノックアウト
• プロモーター、融合タグ、あるいはレポーターを内在性遺伝子に組み込んだノックイン細胞株の作製

構成

1バイアルあたり1 μgのCas9-2A-GFPプラスミドをを含みます。

製品にはガイドRNAは含まれないことにご留意ください。こちらは、Custom CRISPR製品タブから別個に購入していただく必要があります。

原理

CRISPR/Cas系は、細菌および古細菌において、侵入するウイルスやプラスミドに対する防御系として使用されています。近年、単一Cas9タンパク質とノンコーディングガイドRNA（gRNA）という2つの分子成分を用いて、真核細胞系で機能する細菌Streptococcus pyogenes由来のII型CRISPR/Cas系が作られました。Cas9エンドヌクレアーゼを単一gRNAによりプログラムして、希望するゲノム位置でDNA二本鎖切断（DSB）を発生させることができます。亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ZFN）によって誘導されるDSBと同様に、細胞は次に内因性DNA修復過程である非相同末端結合（NHEJ）または相同組換え修復（HDR）を活性化し、標的DSBを修復します。

その他情報

DNAの二本鎖切断を仲介するためには、U6-gRNAプラスミドを併用する必要があります。

文献で使用される典型的なトランスフェクション濃度は、Cas9プラスミドで1.0 μg/μL以上、5 μL以下、U6-gRNAプラスミドで1.0 μg/μL以上、5 μL以下の範囲にあります。<= 5 μL of Cas9 plasmid combined with >（上記用量は、50〜100万個の細胞がヌクレオフェクションすることを仮定しています。）

法的情報

CRISPR使用許諾契約

安全性情報

• 保管分類コード: 10 - Combustible liquids
• WGK: nwg
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable