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Nature Methodsでメルクのアプリケーションノートをお読みください！
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
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メルクのLentiBriteレンチウイルスバイオセンサーの優位性について詳細をご確認ください！ここをクリック
バイオセンサーは、生きた状態の細胞に特定のタンパク質が含まれるかどうかを検出するだけでなく、そのタンパク質の細胞内部位を検出するためにも使用できます。細胞内目標タンパク質を可視化するための手法としては、蛍光顕微鏡検査あるいは低速度撮影ビデオキャプチャのいずれにおいても蛍光標識がよく用いられます。生細胞を破壊せずに可視化できれば、研究者はリアルタイムで細胞の状態を観察できるようになります。
レンチウイルスベクターシステムは、遺伝子産物を細胞に導入するために幅広く使用されている研究用ツールです。レンチウイルストランスフェクションは、化学に基づくトランスフェクションなどの非ウイルス的な手法、例えば分裂／非分裂細胞の高効率トランスフェクション、導入遺伝子の長期安定発現、および低免疫原性などよりも優れています。
EMD Milliporeは、LentiBriteレンチウイルスバイオセンサーをご紹介しています。これは、生細胞およびin vitro分析においてさまざまな細胞／疾患状態下で可視化を行うための、オートファジー、アポトーシス、および細胞構造に関連する重要で基本的なタンパク質をコードするパッケージ済みのレンチウイルス粒子製品群です。
EMD Millipore’のLentiBrite カルレティキュリン-RFP-KDEL レンチウイルス粒子では明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、トランスフェクトが困難な細胞タイプでオートファジーの生細胞分析が行えます。
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バイオセンサーは、生きた状態の細胞に特定のタンパク質が含まれるかどうかを検出するだけでなく、そのタンパク質の細胞内部位を検出するためにも使用できます。細胞内目標タンパク質を可視化するための手法としては、蛍光顕微鏡検査あるいは低速度撮影ビデオキャプチャのいずれにおいても蛍光標識がよく用いられます。生細胞を破壊せずに可視化できれば、研究者はリアルタイムで細胞の状態を観察できるようになります。
レンチウイルスベクターシステムは、遺伝子産物を細胞に導入するために幅広く使用されている研究用ツールです。レンチウイルストランスフェクションは、化学に基づくトランスフェクションなどの非ウイルス的な手法、例えば分裂／非分裂細胞の高効率トランスフェクション、導入遺伝子の長期安定発現、および低免疫原性などよりも優れています。
EMD Milliporeは、LentiBriteレンチウイルスバイオセンサーをご紹介しています。これは、生細胞およびin vitro分析においてさまざまな細胞／疾患状態下で可視化を行うための、オートファジー、アポトーシス、および細胞構造に関連する重要で基本的なタンパク質をコードするパッケージ済みのレンチウイルス粒子製品群です。
- パッケージ済み、GFP & RFPを用いた蛍光タグ付き
- 従来の化学ベースのトランスフェクション法やその他のウイルス以外のトランスフェクション法と比較してトランスフェクション効率が高い
- 分裂細胞、非分裂細胞、および初代細胞または幹細胞などのトランスフェクションが困難な細胞にもトランスフェクト可能
- 細胞機能を破壊しない
EMD Millipore’のLentiBrite カルレティキュリン-RFP-KDEL レンチウイルス粒子では明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、トランスフェクトが困難な細胞タイプでオートファジーの生細胞分析が行えます。
カルレティキュリンは小胞体内腔に常在するタンパク質で、タンパク質のフォールディングやカルシウムの恒常性維持に重要な役割を果たしています。さらに、特定の薬剤でアポトーシスを誘導された細胞により、小胞体から細胞表面へのカルレティキュリンの通過が可能となり、細胞表面に露出したカルレティキュリンは、免疫原性細胞死と呼ばれる食細胞による捕食を促します。 カルレティキュリンと蛍光タンパク質の遺伝子融合体の発現により、シャペロン-基質相互作用の動態と免疫原性細胞死の分析が可能になりました。
EMD Millipore’のLentiBrite カルレティキュリン-RFP-KDEL レンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、トランスフェクトが困難な細胞タイプでカルレティキュリンの動態の生細胞分析が行えます。
EMD Millipore’のLentiBrite カルレティキュリン-RFP-KDEL レンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、トランスフェクトが困難な細胞タイプでカルレティキュリンの動態の生細胞分析が行えます。
アプリケーション
蛍光顕微鏡イメージング：
（データシートの図1を参照）
U2OS 細胞をチャンパースライドに塗布し、レンチウイルス粒子を用いて5のMOIで24時間かけて導入を行いました。 培地を交換してさらに48時間培養してから、細胞をホルムアルデヒドで固定して標本化しました。画像撮影は、オイルイマージョン広視野蛍光顕微鏡により行いました。
カルレティキュリン-RFP-KDEL は細胞質に網目状に出現します。
免疫細胞化学的比較および阻害剤分析：
（データシートの図 2 参照）
図 1 と同様に、HeLa 細胞をチャンバースライドにプレーティングし、MOI＝40 で 24 時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 24時間後に培地を交換してから、細胞をさらに48時間培養しました。 カルレティキュリンに対するポリクローナル抗体を用いた同じ視野の免疫細胞染色（緑）から、RFPタンパク質（赤）と同様な発現パターンを示すことが示されています。
トランスフェクションが困難な細胞タイプ：
（データシートの図3を参照）
初代細胞タイプ HUVEC および HuMSC をチャンパースライドに塗布し、レンチウイルス粒子を用いて、それぞれ 40 と 10 の MOI で 24 時間かけて導入を行いました。
その他の細胞タイプ：
（データシートの図 4 を参照）
HT1080 および REF52 細胞を、図1のように処理しました。
蛍光強度は時間とともに弱くなるため、特にトランスフェクションが困難な細胞株で最適な蛍光画像を得るには、トランスフェクション／インフェクションから 24 ～ 48 時間後に標的発現レベルを分析することが推奨され、これにより最適な生細胞分析が得られます。感染細胞は、トランスフェクション／インフェクションが正常終了したら凍らせて、さらに培養液中で融解すれば、24～48時間が経過しても陽性蛍光発現が維持されます。 蛍光発現の長さと強度は、細胞株によって異なります。トランスフェクションが困難な細胞株には、より高いMOIが必要になる場合があります。
（データシートの図1を参照）
U2OS 細胞をチャンパースライドに塗布し、レンチウイルス粒子を用いて5のMOIで24時間かけて導入を行いました。 培地を交換してさらに48時間培養してから、細胞をホルムアルデヒドで固定して標本化しました。画像撮影は、オイルイマージョン広視野蛍光顕微鏡により行いました。
カルレティキュリン-RFP-KDEL は細胞質に網目状に出現します。
免疫細胞化学的比較および阻害剤分析：
（データシートの図 2 参照）
図 1 と同様に、HeLa 細胞をチャンバースライドにプレーティングし、MOI＝40 で 24 時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 24時間後に培地を交換してから、細胞をさらに48時間培養しました。 カルレティキュリンに対するポリクローナル抗体を用いた同じ視野の免疫細胞染色（緑）から、RFPタンパク質（赤）と同様な発現パターンを示すことが示されています。
トランスフェクションが困難な細胞タイプ：
（データシートの図3を参照）
初代細胞タイプ HUVEC および HuMSC をチャンパースライドに塗布し、レンチウイルス粒子を用いて、それぞれ 40 と 10 の MOI で 24 時間かけて導入を行いました。
その他の細胞タイプ：
（データシートの図 4 を参照）
HT1080 および REF52 細胞を、図1のように処理しました。
蛍光強度は時間とともに弱くなるため、特にトランスフェクションが困難な細胞株で最適な蛍光画像を得るには、トランスフェクション／インフェクションから 24 ～ 48 時間後に標的発現レベルを分析することが推奨され、これにより最適な生細胞分析が得られます。感染細胞は、トランスフェクション／インフェクションが正常終了したら凍らせて、さらに培養液中で融解すれば、24～48時間が経過しても陽性蛍光発現が維持されます。 蛍光発現の長さと強度は、細胞株によって異なります。トランスフェクションが困難な細胞株には、より高いMOIが必要になる場合があります。
研究カテゴリー
アポトーシス &癌
アポトーシス &癌
研究サブカテゴリー
アポトーシス-追加
アポトーシス-追加
構成
カルレティキュリン-TagRFP-KDEL レンチウイルス：
1バイアルに、1 mL あたり少なくとも 3 x 10E8 感染単位（IFU）のレンチウイルス粒子を 25 µL 含む。
ロットに固有の力価情報については、上記製品ボックスの“ウイルス力価”をご覧ください。
プロモーター
EF-1（伸長因子-1）
感染多重度（MOI）
MOI = 感染させた細胞数に対する感染性レンチウイルス粒子数（IFU）の比
高い形質導入効率およびシグナル強度を達成するための典型的なMOI値は、20～40の範囲です。 この標的の場合、細胞種によっては低いMOI（例：HT-1080、HeLa、U2OS）が必要な場合もあれば、高いMOI（例：ヒト間葉系幹細胞（HuMSC）、U2OS、ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）が必要な場合もあります。
注：必要な導入効率とシグナル強度が得られるように、MOI値は各細胞タイプとレンチウイルス標的ごとにご自身で決定して最適化してください。
1バイアルに、1 mL あたり少なくとも 3 x 10E8 感染単位（IFU）のレンチウイルス粒子を 25 µL 含む。
ロットに固有の力価情報については、上記製品ボックスの“ウイルス力価”をご覧ください。
プロモーター
EF-1（伸長因子-1）
感染多重度（MOI）
MOI = 感染させた細胞数に対する感染性レンチウイルス粒子数（IFU）の比
高い形質導入効率およびシグナル強度を達成するための典型的なMOI値は、20～40の範囲です。 この標的の場合、細胞種によっては低いMOI（例：HT-1080、HeLa、U2OS）が必要な場合もあれば、高いMOI（例：ヒト間葉系幹細胞（HuMSC）、U2OS、ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）が必要な場合もあります。
注：必要な導入効率とシグナル強度が得られるように、MOI値は各細胞タイプとレンチウイルス標的ごとにご自身で決定して最適化してください。
品質
HT-1080細胞を導入し、蛍光画像処理によって標的局在化と導入効率を判定することにより評価しました。
物理的形状
PEG沈殿
保管および安定性
保管および取扱い
レンチウイルスは、-80°Cで保存した場合に受領日から最低4カ月間安定です。 初回の融解後は速やかに氷上に置き、実用アリコートは-80°Cで凍結してください。 凍結アリコートは最低2ヵ月間保存できます。 これ以上凍結融解すると、ウイルス力価と導入効率の低下を招くおそれがあります。
安全性に関する重要事項
本製品に添付されている第3世代ベクターなどの複製欠損レンチウイルスベクターが、ヒトや動物で何らかの疾患を引き起こすことは知られていません。 しかし、レンチウイルスは一体化して宿主細胞ゲノムを形成する可能性があるため、挿入型変異のリスクをもたらすおそれがあります。 原料はリスクグループ2であり、BSL2管理下で取り扱う必要があります。 レンチウイルスベクターのバイオセーフティーに関する詳細な考察は、Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
レンチウイルスは、-80°Cで保存した場合に受領日から最低4カ月間安定です。 初回の融解後は速やかに氷上に置き、実用アリコートは-80°Cで凍結してください。 凍結アリコートは最低2ヵ月間保存できます。 これ以上凍結融解すると、ウイルス力価と導入効率の低下を招くおそれがあります。
安全性に関する重要事項
本製品に添付されている第3世代ベクターなどの複製欠損レンチウイルスベクターが、ヒトや動物で何らかの疾患を引き起こすことは知られていません。 しかし、レンチウイルスは一体化して宿主細胞ゲノムを形成する可能性があるため、挿入型変異のリスクをもたらすおそれがあります。 原料はリスクグループ2であり、BSL2管理下で取り扱う必要があります。 レンチウイルスベクターのバイオセーフティーに関する詳細な考察は、Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
法的情報
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
保管分類コード
10 - Combustible liquids
WGK
WGK 2
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
Jan Code
17-10146:
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
関連コンテンツ
Fluorescent lentiviral particles encoding important GFP/RFP fusion proteins related to autophagy, apoptosis, and cell structure that enables live cell imaging.
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
製品に関するお問い合わせはこちら（テクニカルサービス）