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サンプル精製

グラフに、アフィニティークロマトグラフィーによる分離の主要なステップである保持、洗浄、溶出のステップを示します。

分析前の対象分析物の分離または濃縮には、さまざまな化学的／物理的精製方法を適用できます。例えば、吸収、吸着、クロマトグラフィー、蒸留、抽出、イオン交換、ろ過、錯体形成、結晶化、乾燥などがあります。分析前のサンプル前処理は、サンプルを分析法に合った状態にし、サンプルの複雑さを軽減し、妨げとなる不純物を取り除き、分析物を濃縮するのに役立ちます。また適切なサンプルの前処理は、目詰まりを防ぎ、何度も洗浄するプロセスを減らし、クロマトグラフィー媒体の寿命を延ばすことができます。

関連技術資料

  • Solvent Miscibility Table
    Substances are said to be miscible in one another if they dissolve to form a uniform solution. Bookmark or download our miscibility table for common lab solvents.
  • Immobilized Metal Chelate Affinity Chromatography (IMAC)
    This page shows how to separate proteins and peptides with affinity for metal ions by immobilized metal chelate affinity chromatography using HiTrap Chelating HP, Chelating Sepharose Fast Flow,His MicroSpin Purification Module or HisTrap Kit from Cytiva.
  • Non-volatile and Volatile Buffer Systems
    This page shows volatile and non-volatile buffer suggestions for anion and cation exchange chromatography.
  • イオン交換クロマトグラフィー
    イオン交換クロマトグラフィーは、 Genopure Plasmid Midi Kit と Genopure Plasmid Maxi Kit で採用されています。
  • Protein Affinity Chromatography
    Affinity chromatography is the process of bioselective adsorption and subsequent recovery of a compound from an immobilized ligand. This process allows for the highly specific and efficient purification of many diverse proteins and other compounds. The process requires the utilization of an appropriately selective ligand which will bind the desired compound generally with a dissociation constant in the range of 10-4 to 10-8, while permitting recovery under mild conditions. The ligand is generally immobilized on a beaded and porous matrix which may be in the form of a column packing or batchwise adsorption medium.
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関連プロトコル

技術資料・プロトコルの検索

分析用サンプルの調製にあたってラボで採用されている最も一般的な精製法は主に次のとおりです。

透析

透析は、サンプルから塩やその他の低分子量分子を除去するために使用される精製法です。また、サンプルの緩衝液成分の交換にも使用されます。透析は大量の緩衝液が必要な受動的技法です。

緩衝液の交換・脱塩

脱塩は、塩やその他の低分子量の汚染物質をサンプルから除去するシンプルな方法です。また、さまざまなクロマトグラフィー手順前後の緩衝液交換でも使用されるほか、反応を終了させるために試薬を迅速に除去する場合にも使用されます。

分別沈殿

分別沈殿は、少量のサンプルから粗い不純物を除去するために使用されます。沈殿法は、溶解度差の原理でフラクションを分離します。タンパク質の種類によって疎水性の度合いが異なるため、塩分濃度が高くなるとタンパク質間の疎水性相互作用が強まり、沈殿が発生します。

抽出

抽出によるサンプル前処理には、複雑なサンプルや大量のサンプルからの対象分析物の分離が含まれます。このプロセスでは、HPLCやGCのカラムを阻害する可能性のある妨害サンプル成分を除去します。また、分析物の濃度が100倍～5,000倍になるため、検出感度が大幅に向上します。抽出は、選択的かつ特異的なサンプル調製の一環として、より信頼性の高いクロマトグラフィー分析に役立ちます。抽出の種類には、液液抽出、固相抽出（SPE）、固相マイクロ抽出（SPME）があります。

アフィニティークロマトグラフィー

アフィニティークロマトグラフィーは、タンパク質と、クロマトグラフィーマトリックスに結合した特定のリガンドの間の可逆的な相互作用に基づいてタンパク質を分離します。この手法は選択性が高く、大容量のタンパク質精製が可能です。 アフィニティークロマトグラフィーは、対象となるタンパク質に適したリガンドがあれば、いつでも使用できます。

アフィニティークロマトグラフィーによる精製には、捕捉と溶出のステップがあります。捕集相では、クロマトグラフィーマトリックスに固定化された相補的なリガンドに対象タンパク質が特異的かつ可逆的に結合します。その目的は、対象製品を分離、濃縮、安定化させ、その効力と活性を維持することです。マトリックスを洗浄して未結合物質を除去した後、条件を対象タンパク質が溶出しやすいものに変更し、結合した対象タンパク質を回収します。溶出は、競合するリガンドを用いて特異的に行われるか、pH、イオン強度、極性を変更して非特異的に行われます。溶出することで、対象タンパク質を精製、濃縮した状態で回収できます。

関連アプリケーション
固相抽出 (SPE)
固相抽出（SPE：Solid phase extraction）は、クロマトグラフィー分析（例：HPLC、GC、TLC）の前に行う迅速かつ選択的にサンプルを調製・精製するために用いる手法です。SPEはサンプルマトリックスの交換、分析対象物の濃縮、および干渉物質や汚染物質の除去に使用されており、データを向上させ、分析カラムを保護します。
固相マイクロ抽出 (SPME)
固相マイクロ抽出（SPME）はGCやHPLCの前にサンプルから分析対象物質を抽出するための、コーティングファイバーを使用した溶媒不要のサンプル調製法です。
ろ過によるサンプル前処理
ろ過は物理的または化学的特性に基づいて物質を分離します。複雑なサンプルをより単純化し、分析対象物質の純度を高めるため、通常、分析前に試験サンプルをろ過します。これにより、分析結果の質を上げることができます。
低圧液体クロマトグラフィー
低圧液体クロマトグラフィー（LPLC）は、低圧で作動するクロマトグラフィー技術の1つで、移動相はポンプの働きにより固定相が充てんされたカラム内を移動します。
t高分子HPLC
高速液体クロマトグラフィー（HPLC）は、サンプル中のタンパク質やペプチドなどのさまざまな生体高分子を分離、同定するために用いることができます。HPLCでは、溶媒（移動相）を使ってサンプルを吸着物質（固定相）が充てんされたカラム中に高圧で注入します。
関連製品分野
保持型液液抽出／SLE（珪藻土）カラム・樹脂・周辺パーツ
分離漏斗に代わって液-液抽出（LLE）ベースの手法を簡素化するための、EXtrelut® NT吸着剤およびカラムのラインナップをご覧ください。
固相抽出（SPE）・QuEChERS（dSPE）
固相抽出（SPE）およびQuEChERS用のさまざまなサンプル前処理ニーズを満たすカートリッジ、ガラスチューブ、96ウェルプレート、QuEChERSチューブ、オンラインSPE、バキュームマニフォールドおよびその他の材料など、幅広いラインナップをご覧ください。
固相マイクロ抽出（SPME）
固相マイクロ抽出（SPME）は溶媒を必要としないサンプル前処理法です。私たちのSPME製品ラインナップをご覧ください。私たちの画期的なSPME製品には、Smart SPMEファイバー、Nitinolcoreファイバー、BioSPMEなどがあります。
Millex®シリンジフィルター
Millex®（マイレクス）シリンジフィルターは滅菌および非滅菌のタイプがあり、メンブレンの種類が豊富で、ハウジングを選ぶことができるため、さまざまな溶媒やサンプルの種類に合わせられ、HPLC、UHPLC、溶解試験などに利用できます。
クロマト用担体・周辺パーツ
お客様独自のアプリケーションに合わせて設計された、幅広い製品の中から、カラム、各種吸着剤、イオン交換樹脂、分離担体、周辺パーツなど、LPLCアプリケーションに必要なポートフォリオをお選びください。
ラボ用透析・透析ろ過デバイス
透析チューブ、遠心式限外ろ過デバイス、撹拌式セル。サンプル量10 µL～1,200 mLでのバッファー交換、透析、脱塩および透析ろ過を用途とします。
Amicon®遠心式フィルター
下流アプリケーション用のサンプル調製時において、生物・環境サンプルのタンパク質濃縮、脱塩、バッファー交換、分離および透析ろ過を行うための遠心式・加圧限外ろ過式デバイスです。
Milli-Q®ラボ用超純水・純水製造装置
お客様のラボのニーズに合った超純水・純水製造装置を見つけてください。Milli-Q®超純水・純水製造装置は、お客様の用途、水質、使用量、スペースおよび予算の要件を満たします。
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