Buffer Reference Center

• Tabella degli intervalli di pH utili per una selezione di soluzioni tampone biologiche (25 °C, 0.1 M)
• Tabella di preparazione del tampone Tris o Trizma^® – pH vs. temperatura
• Tabella per la preparazione del tampone fosfato – Soluzione 0,2 M
• Preparazione del tampone acido citrico – Na₂HPO₄, pH 2,6–7,61
• Preparazione del tampone acido citrico – sodio citrato, pH 3,0–1
• Preparazione del tampone sodio acetato – acido acetico, pH 3,7- 5,6 1
• Preparazione del tampone Na₂HPO₄ – NaH₂PO₄, pH 5,8-8,0 a 25 °C1
• Preparazione del tampone() sodio citrato, pH 6,2–7,8 25 °C
• Preparazione del tampone sodio carbonato – sodio bicarbonato, pH 9,2–1
• Formule ed equazioni per la preparazione delle soluzioni tampone

Scegliere il tampone biologico adeguato

È possibile scegliere il tampone in base ai valori di pH richiesti e alla pKa, una misura della forza acida che tiene conto del pH, della concentrazione e della temperatura. Inoltre, per ogni specifica applicazione è necessario tenere in debito conto i vincoli regolatori e quelli inerenti la purezza. Le tabelle qui presentate permettono di passare in rassegna, in base ai valori di pH e di pKa, la preparazione di numerose soluzioni tampone di uso comune.

Oltre alle tabelle sottostanti, per facilitare la preparazione della vostra soluzione tampone abbiamo messo a punto alcuni strumenti di calcolo per la preparazione di tamponi.

I buffer di corsa TBE e TAE per la elettroforesi su gel richiedono indicazioni per la preparazione leggermente più complesse: vi aiutiamo a scegliere quella più indicata.

Che cosa sono i gradi delle soluzioni tampone?

I gradi delle soluzioni tampone identificano la qualità e i livelli di impurezza appropriati per i differenti impieghi. Le nostre soluzioni tampone sono classificate secondo sei diversi gradi, adeguati ad usi generici di laboratorio, produzione e formulazione farmaceutica finale o applicazioni intermedie che possono richiedere l’analisi dei metalli in tracce o materiali di purezza specifica.

Tabella degli intervalli di pH utili per una selezione di soluzioni tampone biologiche (25 °C, 0.1 M)

Tamponi	Intervallo di pH utile	pKa (at 20 °C)	pKa (at 25 °C)	pKa (at 37 °C)	Grado reagente	Grado certificato BioPerformance
MES	5,5–6,7	6,16	6,10	5,97	M8250	M2933
Bis-Tris	5,8–7,2	n/d	6,50	6,36	B9754	B4429
ADA	6,0–7,2	6,65	6,59	6,46	A9883	n/d
ACES	6,1–7,5	6,88	6,78	6,54	A9758	A3594
PIPES	6,1–7,5	6,80	6,76	6,66	P6757	P1851
MOPSO	6,2–7,6	n/d	6,90	6,75	M8389	n/d
BIS-TRIS propano	6,3–9,5	n/d	6,8, 9,0	n/d	B6755	B4679
BES	6,4–7,8	7,17	7,09	6,90	B9879	B4554
MOPS	6,5–7,9	7,28	7,20	7,02	M1254	M3183
TES	6,8–8,2	7,50	7,40	7,16	T1375	T5691
HEPES	6,8–8,2	7,55	7,48	7,31	H3375	H4034
DIPSO	7,0–8,2	n/d	7,60	7,35	n/d	n/d
MOBS	6,9–8,3	n/d	7,60	n/d	M3295	n/d
TAPSO	7,0–8,2	n/d	7,60	7,39	T9269	n/d
Tris o Trizma®	7,0–9,0	8,20	8,06	7,72	T1503	T6066
HEPPSO	7,1–8,5	n/d	7,80	6,66	n/d	n/d
POPSO	7,2–8,5	n/d	7,80	7,63	P3405	n/d
TEA	7,3–8,3	n/d	7,80	n/d	n/d	n/d
EPPS	7,3–8,7	n/d	8,00	n/d	E9502	E0276
Tricina	7,4–8,8	8,16	8,05	7,80	T0377	T5816
Gly-Gly	7,5–8,9	n/d	8,20	n/d	G1002	G3915
Bicina	7,6–9,0	8,35	8,26	8,04	B3876	n/d
HEPBS	7,6–9,0	n/d	8,30	n/d	H6903	n/d
TAPS	7,7- 9,1	8,49	8,40	8,18	T5130	T5316
AMPD	7,8–9,7	n/d	8,80	n/d	A9754	n/d
TABS	8,2–9,6	n/d	8,90	n/d	n/d	n/d
AMPSO	8,3–9,7	n/d	9,00	9,10	A6659	n/d
CHES	8,6–10,0	9,55	9,49	9,36	C2885	n/d
CAPSO	8,9–10,3	n/d	9,60	9,43	C2278	n/d
AMP	9,0–10,5	n/d	9,70	n/d	n/d	n/d
CAPS	9,7–11,1	10,56	10,40	10,02	C2632	n/d
CABS	10,0–11,4	n/d	10,70	n/d	C5580	n/d

Tabella di preparazione del tampone Tris o Trizma^® – pH vs. temperatura

pH alla temperatura data
5 °C	25 °C	37 °C
7,76	7,20	6,91
7,89	7,30	7,02
7,97	7,40	7,12
8,07	7,50	7,22
8,18	7,60	7,30
8,26	7,70	7,40
8,37	7,80	7,52
8,48	7,90	7,62
8,58	8,00	7,71
8,68	8,10	7,80
8,78	8,20	7,91
8,88	8,30	8,01
8,98	8,40	8,10
9,09	8,50	8,22
9,18	8,60	8,31
9,28	8,70	8,42
9,36	8,80	8,51
9,47	8,90	8,62
9,56	9,00	8,70

g/L per soluzioni 0,05 M
Trizma® HCL	Trizma® base
7,02	0,67
6,85	0,80
6,61	0,97
6,35	1,18
6,06	1,39
5,72	1,66
5,32	1,97
4,88	2,30
4,44	2,65
4,02	2,97
3,54	3,34
3,07	3,70
2,64	4,03
2,21	4,36
1,83	4,65
1,50	4,90
1,23	5,13
0,96	5,32
0,76	5,47

Tabella per la preparazione del tampone fosfato – Soluzione 0,2 M

Potassio fosfato monobasico anidro (g/L)	Sodio fosfato dibasico eptaidrato (g/L)	pH a 23 °C
22,4	3,49	5,7
22,08	4,29	5,8
21,60	5,37	5,9
21,05	6,60	6,0
20,40	8,05	6,1
19,56	9,93	6,2
18,60	12,07	6,3
17,64	14,22	6,4
16,44	16,90	6,5
15,00	20,12	6,6
13,56	23,34	6,7
12,24	26,29	6,8

Potassio fosfato monobasico anidro (g/L)	Sodio fosfato dibasico eptaidrato (g/L)	pH a 23 °C
10,80	29,51	6,9
9,36	32,73	7,0
7,92	35,95	7,1
6,72	38,63	7,2
5,52	41,31	7,3
4,56	43,46	7,4
3,84	45,07	7,5
3,12	46,68	7,6
2,52	48,55	7,7
2,04	49,09	7,8
1,68	49,89	7,9
1,27	50,81	8,0

Preparazione del tampone acido citrico – Na₂HPO₄, pH 2,6–7,6¹

Acido citrico monoidrato, C₆H₈O₇ • H₂O, PM 210,14; a concentrazione 0,1 M contiene 21,01 g/L. Na₂HPO₄, PM 141,98; a concentrazione 0,2 M contiene 28,40 g/L, oppure Na₂HPO₄ • 2H₂O, PM 178,05; a concentrazione 0,2 M contiene 35,61 g/L.

Mescolare x mL di acido citrico 0,1 M e y mL di Na₂HPO₄ 0,2 M

pH	x mL di acido citrico 0,1 M	y mL di Na2HPO4 0,2 M
2,6	89,10	10,90
2,8	84,15	15,85
3,0	79,45	20,55
3,2	75,30	24,70
3,4	71,50	28,50
3,6	67,80	32,20
3,8	64,50	35,50
4,0	61,45	38,55
4,2	58,60	41,40
4,4	55,90	44,10
4,6	53,25	46,75
4,8	50,70	49,30
5,0	48,50	51,50
5,2	46,40	53,60
5,4	44,25	55,75
5,6	42,00	58,00
5,8	39,55	60,45
6,0	36,85	63,15
6,2	33,90	66,10
6,4	30,75	69,25
6,6	27,25	72,75
6,8	22,75	77,25
7,0	17,65	82,35
7,2	13,05	86,95
7,4	9,15	90,85
7,6	6,35	93,65

Preparazione del tampone acido citrico – sodio citrato, pH 3,0–6,2¹

Acido citrico monoidrato, C₆H₈O₇ • H₂O, PM 210,14; a concentrazione 0,1 M contiene 21,01 g/L. Trisodio citrato diidrato, C₆H₅O₇Na₃ • 2H₂O, PM 294,12; a concentrazione 0,1 M contiene 29,41 g/L.

Mescolare x mL di acido citrico 0,1 M e y mL di trisodio citrato diidrato 0,1 M

pH	x mL di acido citrico 0,1 M	x mL di trisodio citrato 0,1 M
3,0	82,0	18,0
3,2	77,5	22,5
3,4	73,0	27,0
3,6	68,5	31,5
3,8	63,5	36,5
4,0	59,0	41,0
4,2	54,0	46,0
4,4	49,5	50,5
4,6	44,5	55,5
4,8	40,0	60,0
5,0	35,0	65,0
5,2	30,5	69,5
5,4	25,5	74,5
5,6	21,0	79,0
5,8	16,0	84,0
6,0	11,5	88,5
6,2	8,0	92,0

Preparazione del tampone sodio acetato – acido acetico, pH 3,7–5,6¹

Sodio acetato triidrato, CH₃COONa • 3H₂O, PM 136,09; a concentrazione 0,2 M contiene 27,22 g/L.

Mescolare x mL di NaOAc 0,2 M e y mL di HOAc 0,2 M

pH a 18 °C	x mL di NaOAc 0,2 M	x mL di HOAc 0,2 M
3,7	10,0	90,0
3,8	12,0	88,0
4,0	18,0	82,0
4,2	26,5	73,5
4,4	37,0	63,0
4,6	49,0	51,0
4,8	59,0	41,0
5,0	70,0	30,0
5,2	79,0	21,0
5,4	86,0	14,0
5,6	91,0	9,0

Preparazione del tampone Na₂HPO₄ – NaH₂PO₄, pH 5,8-8,0 a 25 °C¹

Na₂HPO₄ • 2H₂O, PM 178,05; a concentrazione 0,2 M contiene 35,61 g/L. Na₂HPO₄ • 12H₂O, PM 358,22; a concentrazione 0,2 M contiene 71,64 g/L. NaH₂PO₄ • H₂O, PM 138,01; a concentrazione 0,2 M contiene 27,6 g/L. Na₂PO₄ • 2H₂O, PM 156,03; a concentrazione 0,2 M contiene 31,21 g/L.

x mL di Na₂HPO₄ 0,2 M, y mL di NaH₂PO₄ 0,2 M; diluiti a 100 mL con H₂O

pH a 25 °C	y mL di Na2HPO4 0,2 M	y mL di Na2PO4 0,2 M
5,8	4,0	46,0
6,0	6,15	43,85
6,2	9,25	40,75
6,4	13,25	36,75
6,6	18,75	31,25
6,8	24,5	25,5
7,0	30,5	19,5
7,2	36,0	14,0
7,4	40,5	9,5
7,6	43,5	6,5
7,8	45,75	4,25
8,0	47,35	2,65

Preparazione del tampone imidazolo (gliossalina) – HCl , pH 6,2–7,8 a 25 °C¹

Imidazolo, C₃H₄N₂, PM 68,08

25 mL di imidazolo 0,2 M (13.62 g/L), x mL di HCl 0,2 M, diluiti a 100 mL con H₂O

pH a 25 °C	x mL di HCl 0,2 M
6,2	21,45
6,4	19,9
6,6	17,75
6,8	15,2
7,0	12,15
7,2	9,3
7,4	6,8
7,6	4,65
7,8	3,0

Preparazione del tampone sodio carbonato – sodio bicarbonato, pH 9,2–10,8¹

Na₂CO₃ • 10H₂O, PM 286,2; a concentrazione 0,1 M contiene 28,62 g/L. NaHCO₃, PM 84,0; a concentrazione 0,1 M contiene 8,40 g/L.

Mescolare x mL di Na₂CO₃ 0,1 M e y mL di Na₂HCO₃ 0,1 M

20 °C	37 °C
x mL di Na2CO3 0,1 M	y mL di Na2HCO3 0,1 M
9,2	8,8	10	90
9,4	9,1	20	80
9,5	9,4	30	70
9,8	9,5	40	60
9,9	9,7	50	50
10,1	9,9	60	40
10,3	10,1	70	30
10,5	10,3	80	20
10,8	10,6	90	10

Formule ed equazioni per la preparazione delle soluzioni tampone

Percentuale in peso (p/v)

(% tampone desiderato / 100) × volume finale del tampone (mL) = g di sostanza di partenza necessaria.

Soluzioni molari

Molarità desiderata × perso formula × volume finale della soluzione (L) = grammi necessari

Equazione di Henderson-Hasselbach

Riferimenti bibliografici

1. Dawson R, Elliot D, Elliot W, Jones KM. 1986. Data for Biochemical Research. 3rd ed.. Oxford Science Publ..