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Terreno di Eagle modificato da Dulbecco e F12 (DMEM/F12)

Quattro flaconi di terreno DMEM F12, contenenti un liquido arancione.

Negli ultimi anni, in letteratura sono reperibili da tempo numerosi riscontri positivi sulla crescita di diversi tipi di linee cellulari in terreni privi di siero, sostituito con la supplementazione di nutrienti, fattori di crescita e ormoni. Mather e Sato (BBRC, 1985) riportano la coltivazione di cellule di Leydig e di Sertoli in terreno senza siero ma contenente insulina, transferrina, fattore di crescita epidermico, ormone luteinizzante o ormone follicolo-stimolante, somatomedina e ormone della crescita.

Sebbene gli ormoni e le loro concentrazioni venissero ottimizzati in base al tipo di cellula in studio, il terreno risultato ottimale per questi studi consisteva in una miscela 1:1 di terreno DMEM e della miscela di nutrenti del terreno Ham's F-12, nota anche come F-12 di Ham. Questa miscela, oggi nota come terreno DMEM/F12, contiene, tra i vari componenti, 21 amminoacidi, 10 vitamine, glucosio, ferro e zinco.

Il terreno DMEM/F12 è più ricco e più complesso del DMEM. A questa formulazione può essere aggiunto il tampone HEPES, alla concentrazione finale di 15 mM, per compensare la perdita di capacità tampone causata dall'eliminazione del siero. Questo terreno sintetico non contiene siero, proteine, lipidi né fattori di crescita e perciò può richiedere la supplementazione con siero fetale bovino (FBS) a seconda del tipo di coltura cellulare. Alcune formulazioni commerciali possono includere anche glutammina o rosso fenolo.

Applicazioni del terreno DMEM/F12

Applicazioni del terreno DMEM/F12

Il terreno basale DMEM/F12 è spesso utilizzato in applicazioni che richiedono terreni privi di siero o concentrazioni di siero ridotte, come le colture 3D di organoidi o le colture di cellule staminali. Questo terreno trova impiego anche nella trasfezione di cellule dove sono richiesti livelli di siero contenuti o l'assenza di siero.

Oltre alle cellule staminali che spesso necessitano di un ambiente privo di siero o di concentrazioni di siero ridotte, anche le cellule primarie possono essere coltivate in DMEM/F12. Tra queste fibroblasti, cellule MDCK, linee cellulari neuronali, cellule gliali e cellule muscolari lisce che mostrano crescita e funzione equivalenti o superiori a quelle di cellule primarie supplementate con concentrazioni di siero elevate. Inoltre, la morfologia di cellule coltivate in DMEM/F12 è identica a quella di cellule cresciute alla presenza di alti livelli di siero.

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