P6556

Proteinasi K

lyophilized powder, ≥30 units/mg protein

• Sinonimo/i: Endopeptidasi K
• Numero CAS: 39450-01-6
• UNSPSC Code: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• EC Number: 254-457-8
• NACRES: NA.54
• MDL number: MFCD00132129
• Numero CE: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥30 units/mg protein

Proprietà

• form: lyophilized powder
• Quality Segment: 300
• specific activity: ≥30 units/mg protein
• mol wt: 28.93 kDa
• technique(s): DNA extraction: suitable
• solubility: H₂O: soluble 1 mg/mL, clear, colorless
• foreign activity: Dnase ≤30 Kunitz units/mg solid, RNase ≤0.003 Kunitz units/mg solid
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C

Descrizione

Application

Il prodotto P6556 è fornito come polvere liofilizzata. Il prodotto P6556 è stato utilizzato per frammentare le proteine del cristallino umano[1]. Il footprinting da proteasi ottenuto mediante digestione con proteinasi K può rivelare le interazioni di superficie proteina-proteina.[2] L'enzima di Sigma è stato utilizzato nella fase di pre-ibridazione degli embrioni di pollo.[3] È stato inoltre utilizzato per l'arricchimento di PrP^Sc, una proteina prionica presente nei campioni di scrapie di pecora, criceto e topo.[4]

La proteinasi K è usata per l'inattivazione proteolitica delle nucleasi durante la purificazione di DNA e RNA.
Viene utilizzata per la rimozione di endotossine legate a proteine​cationiche come il lisozima e la ribonucleasi A.
È usata per l'isolamento dei mitocondri epatici, di lieviti e di fagioli mung
E′ utilizzata per determinare la localizzazione degli enzimi nelle membrane
Viene usata su sezioni di tessuto incluse in paraffina per esporre i siti di legame dell'antigene e consentire il legame con l′anticorpo
Usata per la digestione di proteine da campioni di tessuto cerebrale per la ricerca sui prioni nelle encefalopatie spongiformi trasmissibili (TSE). Il prodotto P6556 è fornito come polvere liofilizzata. Il prodotto P6556 è stato utilizzato per frammentare le proteine del cristallino umano[1].

Utile per l′inattivazione proteolitica delle nucleasi durante l′isolamento di DNA ed RNA.

Utile per l′inattivazione proteolitica delle nucleasi durante l′isolamento di DNA ed RNA.
Rimuove le endotossine che si legano alle proteine cationiche come lisozima e ribonucleasi A.
Segnalato come utile per l′isolamento dei mitocondri epatici, di lievito e di fagiolo mungo
Determinazione della localizzazione degli enzimi sulle membrane
Trattamento di sezioni di tessuto incluse in paraffina per esporre i siti di legame dell′antigene per la marcatura dell′anticorpo.
Digestione delle proteine da campioni di tessuto cerebrale per la ricerca sui prioni nell′encefalopatia spongiforme trasmissibile (EST).

Biochem/physiol Actions

La proteinasi K è una serin proteasi stabile e molto reattiva. Le evidenze emerse da studi sulla struttura cristallina e molecolare indicano che l′enzima appartiene alla famiglia delle subtilisine con una triade catalitica nel sito attivo (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴). È stabile in un vasto assortimento di ambienti: pH, sali tampone, detergenti (SDS) e temperatura. In presenza di SDS 0,1-0,5%, la proteinasi K conserva la sua attività e digerisce una serie di proteine e nucleasi nelle preparazioni di DNA senza compromettere l′integrità del DNA isolato.

La proteinasi K ha un'ampia specificità e degrada diverse proteine anche allo stato nativo. Scinde principalmente il legame peptidico adiacente al gruppo carbossilico degli amminoacidi alifatici e aromatici con gruppi α-amminici bloccati.[4][5] Il pH ottimale è compreso tra 7,5 e 9,0 e il punto isoelettrico è 8,9[4] Per l′attivazione è necessaria la presenza di Ca^{2 +} (1-5 mM) La proteinasi K è inibita dal diisopropilfluorofosfato (DFIP) e dal fenilmetansolfonil fluoruro (PMSF).

Other Notes

Una unità idrolizzerà l′emoglobina denaturata con urea per produrre l′equivalente di colore di 1,0 μmole di tirosina al minuto a pH 7,5 e a 37 °C (colore sviluppato con il reattivo di Folin-Ciocalteu).

Informazioni sulla sicurezza

• pictograms: GHS08,GHS07
• signalword: Danger
• hcodes: H315,H319,H334,H335
• pcodes: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves