HTS031M

Preparazione di membrane con CRTH2 ChemiSCREEN

Human CRTH2 / DP2 / GPR44 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPgammaS binding.

• Codice UNSPSC: 41106514
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.41

Proprietà

• Origine biologica: human
• Livello qualitativo: 100
• Ricombinante: expressed in Chem-1 cells
• Produttore/marchio commerciale: ChemiScreen; Chemicon^®
• tecniche: ligand binding assay: suitable (GTPγS); radioligand binding assay (RLBA): suitable
• N° accesso NCBI: NM_004778.2
• N° accesso UniProt: Q9Y5Y4
• Condizioni di spedizione: dry ice

Descrizione

Descrizione generale

CRTH2 umana

La molecola omologa del recettore chemiotattico espresso sulle cellule Th2 (CRTH2) è un recettore accoppiato a proteina G (GPCR) correlato ai recettori chemiotattici simili ai recettori per i peptidi formilati (FPR) che risulta altamente espresso su linfociti Th2, eosinofili, basofili e linfociti T citotossici di tipo 2 (Nagata et al., 1999). Il ligando più potente di CRTH2 è la prostaglandina PGD₂, uno dei principali mediatori della reazione allergica derivato dai mastociti (Hirai et al., 2001). Poiché anche un altro GPCR denominato DP è attivato da PGD₂, il contributo relativo di DP e di CRTH2 alla reazione allergica mediata da PGD₂ è in fase di studio. Un antagonista a piccola molecola di CRTH2, ramatroban, attenua la iperresponsività bronchiale mediata da PGD₂ e l′infiammazione indotta da antigene (Sugimoto et al., 2003; Shichijo et al., 2003). Le preparazioni di membrane con CRTH2 di Chemicon sono preparazioni di membrane grezze ottenute dalle nostre linee cellulari proprietarie ricombinanti e stabili che garantiscono livelli elevati di espressione di superficie di GPCR, pertanto rappresentano lo strumento ideale nelle applicazioni HTS per lo screening delle interazioni antagonisti di PGD₂/CRTH2. Le preparazioni di membrane mostrano un Kd di 10 nM per la [³H]-prostaglandina D₂. Con 2,5 μg/pozzetto di preparazione di membrane con CRTH2 e 10 nM di [³H]-prostaglandina D₂, si ottiene un rapporto segnale vs background superiore a 5 volte.

Applicazioni

Saggio di binding a radioligandi e a GTPgammaS.

Azioni biochim/fisiol

Classe di GPCR: A

Proteina target: CRTH2 / DP2 / GPR44

Sottofamiglia bersaglio: prostanoidi

Confezionamento

1 mL

Qualità

Valori del rapporto segnale:background e del legame specifico ottenuti in un saggio di binding competitivo con preparazione di membrane con CRTH2 e prostaglandina D₂ non marcata.
10 g/pozzetto
Segnale:background 12,2
Legame specifico (cpm) 4.307

Valori di IC50 dei ligandi ottenuti in un saggio di binding competitivo con preparazione di membrane con CRTH2.
IC50 (nM) prostaglandina D₂ 4,5
13,14-diidro-15-cheto prostaglandina D₂ 14,7
BW A868C 7429

SPECIFICHE: 1 unità = 10 g
Bmax: 13,93 pmol/mg
Kd: 10 nM

Specifiche

Condizioni di incubazione
Le membrane vengono miscelate con il ligando radioattivo e il competitor non marcato (per le concentrazioni testate, vedere le Figure 1 e 2) in tampone di binding in una piastra a 96 pozzetti in materiale non legante, quindi vengono incubate per 1-2 h. Prima della filtrazione, una piastra di raccolta FC a 96 pozzetti (Millipore N° Cat. MAHF C1H) viene rivestita con polietilenimmina allo 0,33% per 30 min, quindi viene lavata con HEPES 50mM, pH 7,4, e BSA allo 0,5%. La reazione di binding viene trasferita nella piastra filtrante e lavata 3 volte (1 mL/pozzetto per ogni lavaggio) con tampone di lavaggio. La piastra viene asciugata e contata.
Tampone di binding: HEPES 50 mM, MnCl2 10 mM, EDTA 1 mM, BSA allo 0,2%, pH a 7,0 e filtrazione.
Tampone di lavaggio: HEPES 50 mM, NaCl 0,5 M, pH a 7,4 e filtrazione.
Radioligando: [3H] prostaglandina D2 (Amersham, N° Cat.: TRK734)

Stato fisico

Liquido in tampone di packaging: Tris 50 mM, pH 7,4, glicerolo al 10% e BSA all′1%, senza conservanti. Metodo di packaging: Le proteine delle membrane sono state portate alla concentrazione di 0,5 mg/mL in 1 mL di tampone di packaging, congelate rapidamente e conservate a -80°C.

Stoccaggio e stabilità

Conservare in congelatore a -70°C per un massimo di 2 anni. Non congelare e scongelare.

Note legali

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 2
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable