DNA/蛋白质电泳及故障排除表

• 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的有效分离范围
  
• 琼脂糖凝胶中DNA的有效分离范围
  
• 加样染料的DNA大小迁移
  
• SDS-PAGE蛋白电泳疑难解答指南

聚丙烯酰胺凝胶中DNA的有效分离范围

%丙烯酰胺(w/v)1	有效分离范围（bp）
3.5	1000-2000
5.0	80-500
8.0	60-400
12.0	40-200
15.0	25-150
20.0	6-100
1N,N'-亚甲基双丙烯酰胺的含量是丙烯酰胺浓度的1/30。

琼脂糖凝胶中DNA的有效分离范围

%琼脂糖（w/v）	线性DNA分子（kb）的有效分离范围
0.3	5-60
0.6	1-20
0.7	0.8-10
0.9	0.5-7
1.2	0.4-6
1.5	0.2-3
2.0	0.1-2

加样染料的DNA大小迁移

琼脂糖浓度（%w/v）	二甲苯	溴酚蓝
0.1-1.5	4-5 kb	400-500 bp
2.0-3.0(筛分琼脂糖)	750 bp	100 bp
4.0-5.0(筛分琼脂糖)	125 bp	25 bp

SDS-PAGE蛋白电泳疑难解答指南

问题	可能的原因	解决方案
微弱或缺失的蛋白条带	加样量低于染色剂的检测水平	检查A280并增加样品浓度
		使用更敏感的染色剂（例如银染）
	蛋白质没有固定在凝胶中	使用同样固定蛋白质的染色剂
		使用凝胶固定液
	小肽（<4kda）不固定在凝胶中	用5%戊二醛固定凝胶。染色前用水冲洗凝胶移液器吸头
	蛋白质被降解	检查A280并避免蛋白酶污染
	蛋白质跑出凝胶	使用较高浓度的PAGE凝胶。推荐凝胶浓度参见预制凝胶，如果大小未知，可使用4-20%凝胶
染色后在凝胶上成膜	沉淀考马斯蓝R	在甲醇中漂洗凝胶15秒，立即回到水中或脱色
电泳条带分辨率差	蛋白浓度高	每蛋白负载10μg或每蛋白提取物100μg
	凝胶的年龄，由于碱催化	订购新鲜预制凝胶或浇铸新鲜凝胶
	凝胶浓度不当	推荐凝胶浓度参见预制凝胶，如果大小未知，可使用4-20%凝胶
电泳条带弥散	高盐浓度	透析样品，用TCA沉淀蛋白或使用脱盐柱
	蛋白浓度高	每蛋白负载10μg或每蛋白提取物100μg
	蛋白质聚集	样品中加入4-8 M尿素
	电压偏高	10-15v/cm电泳
孔内蛋白质沉淀	疏水蛋白	样品中加入4-8 M尿素
样品中的白色沉淀	SDS沉淀	可能是由于样品中存在胍盐或钾盐