T7启动子系统

• T7启动子具有什么样的序列？
• T7质粒表达系统特征
• MAT™标签技术
• T7启动子和表达系统指南

 T7启动子具有什么样的序列？

T7 启动子是转录起始位点 +1 (5' – TAATACGACTCACTATAG – 3')前端18 bp长度的DNA序列，可被 T7 RNA 聚合酶识别¹。T7启动子常用于调节重组蛋白的基因表达，支持各种下游研究应用²。

 T7质粒表达系统特征

基于细菌T7启动子的载体可表达、检测和纯化大肠杆菌中的重组FLAG^®和 MAT™（金属亲和标签）融合蛋白。多种含有 T7 启动子的载体可为FLAG^®和MAT™标记融合蛋白提供双重标签选项。这类载体可带来氨苄青霉素耐受性，以便于选择阳性转化体。此外，这些载体还含有 T1T2转录终止子、pMB1（pBR322 的衍生物）复制起点、f1 起点和抑制 T7 启动子的 lacI 基因。

pT7-FLAG^®和 pT7-MAT™载体提供极为强效的T7/lac启动子。这类表达载体可提供比tac启动子系统更高的重组蛋白产量。然而，T7 启动子公认存在背景（“漏”）表达问题——当重组蛋白对宿主细胞存在毒性时，这一缺点就会放大。因此，我们的载体包含位于启动子下游的 lac 操纵子 (lacO) 序列，旨在减少漏表达。与 tac 启动子系统不同，pT7 载体必须在含 T7 聚合酶来源的宿主中表达，如 (DE3) 溶原菌株。

 MAT™标签技术

MAT™标签或金属亲和标签 (HNHRHKH) 专为使用 HIS-Select 镍和钴亲和凝胶纯化重组 MAT™ 融合蛋白而设计。HIS-Select 产品可高度选择性纯化组氨酸标记的融合蛋白（例如 MAT™ 融合蛋白）。我们的许多最新载体都使用 MAT™ 标签，通常与众所周知的FLAG^®标签结合使用。含载体的MAT™标签以N端或C端标签的形式提供。

图 1. 卡那霉素基因和氨苄青霉素基因可提高大肠杆菌筛选灵活性

参考文献

1. Rong M, He B, McAllister WT, Durbin RK. 1998. Promoter specificity determinants of T7 RNA polymerase. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95(2):515-519. https://doi.org/10.1073/pnas.95.2.515

2. Komura R, Aoki W, Motone K, Satomura A, Ueda M. High-throughput evaluation of T7 promoter variants using biased randomization and DNA barcoding. PLoS ONE. 13(5):e0196905. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0196905