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DUO92012

Sigma-Aldrich

Kit de réactifs de détection in situ en fond clair Duolink®

Synonyme(s) :

in situ Proximity Ligation Assay reagent, Protein Protein Interaction Assay reagent

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About This Item

Code UNSPSC :
12352200
Nomenclature NACRES :
NA.32

Gamme de produits

Duolink®

Conditionnement

pkg of Box A (-20°C)
pkg of Box B (2-8°C)

Technique(s)

proximity ligation assay: suitable

Adéquation

suitable for brightfield

Température de stockage

−20°C

Catégories apparentées

Application

L′essai de ligature de proximité (« proximity ligation assay », PLA®) Duolink® assure la détection endogène d′interactions protéiques, de modifications post-traductionnelles et de niveaux d′expression de protéines au niveau d′une molécule individuelle dans des échantillons de cellules et de tissu fixés.

Pour utiliser ce produit, suivez le Protocole in situ en fond clair Duolink®.

Rendez-vous sur notre Centre d′information sur les essais PLA Duolink® pour en savoir plus sur la façon de réaliser une expérience avec Duolink®, les applications, la résolution des problèmes, etc.

Pour réaliser une expérience PLA in situ Duolink® complète, vous avez besoin de deux anticorps primaires(validés par PLA, IHC, ICC ou IF) reconnaissant deux épitopes cibles. Il vous faut également une paire de sondes PLA de différentes espèces (une PLUS et une MOINS), des réactifs de détection, des tampons de lavage et un milieu de montage. Notez que les anticorps primaires doivent provenir de la même espèce que les sondes PLA Duolink®. L′analyse se fait avec de la HRP pour la détection en fond clair.

Spécificité
Les réactifs de détection en fond clair sont prévus pour les échantillons présentant une autofluorescence significative.

Note d′application
Deux anticorps primaires développés dans des espèces différentes sont nécessaires. Testez vos anticorps primaires (de type IgG, monoclonaux ou polyclonaux) avec un test standard d′immunofluorescence (IF), d′immunohistochimie (IHC) ou d′immunocytochimie (ICC) pour déterminer les conditions optimales de fixation, de blocage et de titrage. Les réactifs de PLA in situ Duolink® peuvent être utilisés sur des cellules fixées, des cellules centrifugées sur un appareil Cytospin, des cellules cultivées sur une lame, fixées au formol et incluses en paraffine (FFPE), ou du tissu (frais ou congelé). Aucun nombre minimal de cellules n′est requis.

Laissez-nous faire le travail pour vous et découvrez notreProgramme de services sur mesure pour accélérer vos projets Duolink®

Consulter la liste complète des produits Duolink®
Spécificité
Les réactifs de détection en fond clair sont prévus pour les échantillons présentant une autofluorescence significative.

Note d'application
Cette application nécessite deux anticorps primaires produits par des espèces différentes. Testez vos anticorps primaires (de type IgG, monoclonaux ou polyclonaux) avec un test standard d'immunofluorescence (IF), d'immunohistochimie (IHC) ou d'immunocytochimie (ICC) pour déterminer les conditions optimales de fixation, de blocage et de titrage. Les réactifs de in situ Duolink® peuvent être utilisés sur des cellules fixées, des cellules centrifugées sur un appareil Cytospin, des cellules cultivées sur une lame, fixées au formol et incluses en paraffine (FFPE), ou du tissu (frais ou congelé). Aucun nombre minimal de cellules n'est requis.

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Caractéristiques et avantages

  • Aucune surexpression ou manipulation génétique nécessaire
  • Grande spécificité (moins de faux positifs)
  • Sensibilité à une seule molécule du fait de l′amplification en cercle roulant (RCA)
  • Quantification relative possible
  • Aucun équipement spécial requis
  • Plus rapide et plus simple que la technique FRET
  • Exactitude accrue par rapport à co-IP
  • Résultats prêts à être publiés

Composants

Ce produit comprend les éléments suivants :
Boîte A :
  • 5x ligature - contient des oligonucléotides qui s′hybrident aux sondes PLA ainsi que tous les éléments nécessaires à la ligature, hormis la ligase
  • 1x ligase (1 unité/μl)
  • 5x amplification - contient tous les éléments nécessaires à l′amplification RCA (amplification par cercle roulant ou « rolling circle amplification »), hormis la polymérase
  • 5x détection en fond clair - contient des sondes oligonucléotidiques marquées avec de la peroxydase de raifort (HRP) qui s′hybride au produit de RCA
  • 1x polymérase (10 unités/μl)

Boîte B :
  • 1x peroxyde d′hydrogène - contient 0,3 % de peroxyde d'hydrogène
  • Réactifs de type substrat A-D - contient tous les éléments de type substrat nécessaires à la réaction enzymatique de la HRP
  • 1x coloration nucléaire - contient de la solution d′hématoxyline de Mayer servant à colorer les noyaux des cellules
Consulter la fiche technique pour de plus amples informations.

Éléments non inclus dans le kit de détection :

Anticorps primaires, sondes PLA, tampons de lavage, milieu de montage

Autres remarques

Stockage/Stabilité
Conserver la boîte A ainsi que tous ses composants à -20 °C. Il est recommandé de conserver en permanence les enzymes au froid (à -20 °C) ; utiliser un bloc de congélation lorsqu′elles sont sorties du congélateur.
Conserver la boîte B ainsi que tous ses composants entre 2 et 8 °C.

Informations légales

Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Mention d'avertissement

Danger

Classification des risques

Acute Tox. 3 Dermal - Acute Tox. 4 Inhalation - Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Flam. Liq. 2 - Muta. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1

Code de la classe de stockage

3 - Flammable liquids

Point d'éclair (°F)

42.8 °F

Point d'éclair (°C)

6 °C

Certificats d'analyse (COA)

Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".

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Clinical chemistry, 56(1), 99-110 (2009-11-21)
The in situ proximity ligation assay (PLA) allows a protein or protein complex to be represented as an amplifiable DNA molecule. Recognition is mediated by proximity probes consisting of antibodies coupled with oligonucleotides. Upon dual binding of the proximity probes
Lei Zhu et al.
The Prostate, 73(2), 219-226 (2012-07-19)
PSA is the most useful prostate cancer marker. However, its levels are increased also in some non-malignant conditions. In circulation, the majority of PSA is complexed with protease inhibitors, including α(1) -antichymotrypsin (ACT). The proportion of the PSA-ACT complex is
Annabel Christ et al.
Developmental cell, 22(2), 268-278 (2012-02-22)
Sonic hedgehog (SHH) is a regulator of forebrain development that acts through its receptor, patched 1. However, little is known about cellular mechanisms at neurulation, whereby SHH from the prechordal plate governs specification of the rostral diencephalon ventral midline (RDVM)
Shaida Ouladan et al.
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Solitary fibrous tumors (SFTs) are rare mesenchymal neoplasms, displaying variable morphological and clinicopathological features. Supportive immunohistochemical markers such as CD34, CD99, BCL2 and LSD1 are commonly applied in the differential diagnosis of SFTs, although none is sufficiently sensitive or specific
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