D5025

Désoxyribonucléase I from bovine pancreas

Type IV, lyophilized powder, ≥2,000 Kunitz units/mg protein

• Synonyme(s) : DNase I, Désoxyribonucléate-5′-oligonucléotido-hydrolase
• Numéro CAS: 9003-98-9
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-667-0
• Numéro MDL: MFCD00130918
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Source biologique: bovine pancreas
• Niveau de qualité: 300
• Type: Type IV
• Forme: lyophilized powder
• Activité spécifique: ≥2,000 Kunitz units/mg protein
• Poids mol.: ~31 kDa
• Produit purifié par: chromatography
• Composition: Protein, ≥80%
• Technique(s): DNA purification: suitable
• Solubilité: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear, colorless
• Adéquation: suitable for molecular biology
• Application(s): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• Activité étrangère: Chymotrypsin ≤0.5%; Protease ≤0.05%; RNase ≤0.02%
• Conditions d'expédition: wet ice
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

La DNase I est utilisée en première étape pour couper l′ADN en vue de l′incorporation de bases marquées dans l′ADN. L′enzyme proposée par Sigma a été utilisée pour le traitement de tissus de cerveaux de rat. Cette étude a montré que la croissance axonale sur les astrocytes n′est pas inhibée par les oligodendrocytes. Dans une autre étude, des échantillons fixés et décongelés d′E. coli ont été digérés avec la DNase I de Sigma avec d′autres enzymes. La digestion a été réalisée avant la perméabilisation et la coloration des acides nucléiques.

La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a été utilisée dans une étude pour l′analyse des nucléases de Bacillus subtilis par zymogramme à deux dimensions. La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a également été utilisée dans une étude évaluant l′effet d′agents se liant dans le petit sillon ou le gros sillon de l′ADN et d′agents intercalants sur l′association avec l′ADN des protéines RecA et désoxyribonucléase I, qui se lient dans le petit sillon.

Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.

Actions biochimiques/physiologiques

La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester situées à côté de pyrimidines et produit des polynucléotides comportant des 5′-phosphates terminaux. En présence de Mg²⁺, la DNase I clive indépendamment chaque brin d′ADN et les sites de clivage sont répartis au hasard. Les deux brins d′ADN sont clivés à peu près au niveau du même site en présence de Mn²⁺. Il a été montré que le pH optimal se situe entre 7 et 8. Les cations divalents tels que Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ et Zn²⁺ activent l′enzyme. Une concentration de Ca²⁺ 5 mM permet de stabiliser l′enzyme vis-à-vis de la digestion protéolytique. La DNase 1 de pancréas de bovin est composée de quatre éléments A, B, C et D, pouvant être distingués par chromatographie, dans des rapports molaires respectifs pour A, B et C de 4/1/1. D est présent en quantités très faibles. Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et l′actine sont connus pour inhiber l′activité enzymatique.

Définition de l'unité

Une unité Kunitz produit une ΔA₂₆₀ de 0,001 par minute et par ml à pH 5,0 et 25 °C, en utilisant comme substrat de l′ADN de type I ou III.

Forme physique

Poudre lyophilisée contenant du chlorure de calcium

Notes préparatoires

Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu′elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d′activité peut être d′environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active jusqu′à cinq heures à 60 °C entre pH 5 et pH 7, et devient inactive après < 10 minutes à 68 °C. Sa perte d′activité est de 6 %/heure dans un tampon d′acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.

Remarque sur l'analyse

Protéine déterminée par la réaction du biuret.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H334
• Conseils de prudence: P261 - P284 - P501
• Classification des risques: Resp. Sens. 1
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 3
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable