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48-623MAG

Millipore

Kit MILLIPLEX® de double détection sur billes magnétiques des STAT3 phospho/totales (test multiplex de signalisation cellulaire)

Synonyme(s) :

Kit de détection sur billes des STAT3, Kit de signalisation cellulaire des STAT3, Kit phospho/total à 2 analytes

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About This Item

Code UNSPSC :
12161503
Nomenclature NACRES :
NA.47
Le tarif et la disponibilité ne sont pas disponibles actuellement.

Espèces réactives

human, mouse

Niveau de qualité

200

Fabricant/nom de marque

Milliplex®

Technique(s)

multiplexing: suitable

Méthode de détection

fluorometric (Luminex® xMAP®)

Température de stockage

2-8°C

Description générale

Les protéines STAT ("Signal Transducers and Activators of Transcription", transducteurs de signaux et activateurs de transcription) sont utilisées par les récepteurs d'un large éventail de ligands (cytokines, hormones, facteurs de croissance, neurotransmetteurs, etc.). La phosphorylation des protéines STAT, au niveau de résidus tyrosine conservés, active leur dimérisation via le domaine SH2, rapidement suivie de leur translocation dans le noyau. Les dimères STAT se lient à des motifs de l'ADN de l'élément de réponse à l'interféron (IRE pour "Interferon Response Element") et de la séquence activée par l'interféron gamma (GAS pour "Gamma interferon-Activated Sequence"), entraînant la régulation de la transcription des gènes en aval. Les voies STAT jouent un rôle important dans l'oncogenèse, la progression tumorale, l'angiogenèse, la motilité cellulaire, les réponses immunitaires et la différenciation des cellules souches.La phosphorylation des protéines est le principal mécanisme de régulation des fonctions cellulaires dans toutes les cellules eucaryotes. Des phosphorylations anormales sont impliquées dans la survenue et le développement de nombreuses maladies telles que les troubles métaboliques, les maladies inflammatoires, le cancer, etc. Les modifications de phosphorylation des protéines sont attribuables à des modifications des évènements de phosphorylation ainsi qu'à des changements liés à la concentration en protéines totales. Afin de distinguer les modifications de phosphorylation des changements d'expression des protéines, il est important de normaliser le signal de phosphorylation par rapport au signal des protéines totales. Pour répondre à ce besoin, le kit MILLIPLEX® MAP de double détection des STAT3 phospho/totales (réf. 48-623MAG) est conçu pour la détection simultanée des STAT3 phosphorylées (Tyr705) et des STAT3 totales, dans un seul et même puits, avec le système Luminex.

Spécificité

La réactivité croisée entre les anticorps et tous les autres analytes du kit est non détectable ou négligeable.

Application

Les dosages intracellulaires multiplex à base de billes utilisant la technologie Luminex permettent de quantifier de façon relative et simultanée les protéines de plusieurs voies de phosphorylation ou les protéines totales présentes dans des échantillons de lysats cellulaires et tissulaires. Les analytes disponibles pour ce kit multiplex sont les suivants : STAT3 (totales), STAT3 (Tyr705). Il s'agit d'un dosage réalisé par une incubation d'une nuit (4 °C). Le kit doit être utilisé avec le tampon de dosage fourni. Ce dosage nécessite 25 μl de lysat cellulaire filtré et dilué par puits. La plage de travail de la concentration en protéines va de 1 à 25 μg de protéines totales/puits (25 μl/puits à une concentration de 40 à 1 000 μg/ml). Analytes disponibles :STAT3 (totales)STAT3 (Tyr705)

Conditionnement

Plaque de 96 puits

Informations légales

Luminex is a registered trademark of Luminex Corp
MILLIPLEX is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
xMAP is a registered trademark of Luminex Corp

Clause de non-responsabilité

Sauf indication contraire dans notre catalogue ou toute autre documentation associée au(x) produit(s), nos produits sont uniquement destinés à la recherche et ne sauraient être utilisés à d'autres fins, ce qui inclut, sans s'y limiter, les utilisations commerciales non autorisées, les utilisations diagnostiques in vitro, les utilisations thérapeutiques ex vivo ou in vivo, ou tout type de consommation ou d'application chez l'être humain ou chez l'animal.

Pictogrammes

CorrosionExclamation markEnvironment
GHS05,GHS07,GHS09

Mention d'avertissement

Danger

Mentions de danger

H302,H315,H318,H410

Classification des risques

Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - Eye Dam. 1 - Skin Irrit. 2

Code de la classe de stockage

10 - Combustible liquids

Certificats d'analyse (COA)

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Cell Signaling Multiplex Assays | MILLIPLEX® Assays

Uncover how cells communicate with MILLIPLEX® cell signaling multiplex assays. Multiplexing with cell signaling phosphoprotein assays based on Luminex® xMAP® technology helps researchers measure phosphoproteins and total proteins within the same or different pathways from a single sample.

Questions

  1. Do you have a protocol for sample preparation to run PBMCs in the Milliplex Cell Signaling assays?

    1 réponse

    1. The protocol for sample preparation in the Milliplex Cell Signaling assays has been developed by the R&D team specifically for a custom assay. It is important to note that this protocol has not been tested in all Cell Signaling panels, so volumes and concentrations may need to be optimized for individual studies.

      Here is a short protocol for PBMC cell lysis:
      1. If PBMC cells are frozen, it is recommended to allow cells to recover for 24 hours in complete media as less than 24 hours of recovery can lead to a decrease in signal.
      2. After 24 hours of recovery, count the cells using an appropriate cell counter.
      3. Pellet the PBMC cells at 1000 x g using a tabletop centrifuge for 5 minutes at room temperature.
      4. Remove the supernatant and wash the cells with PBS.
      5. Pellet the PBMC cells again at 1000 x g using a tabletop centrifuge for 5 minutes at room temperature.
      6. Add 10uL of Lysis Buffer (with 2x concentrated protease inhibitors added just prior to use) per 1-2 million cells.
      7. Gently vortex for 30 seconds before transferring the cell lysate into a centrifuge tube.
      8. Gently rock the cell lysate for 10 minutes at 4°C.
      9. Pellet unbroken cells and organelles at 12,000 x g for 10 minutes at 4°C.
      10. Transfer the clear supernatant into a new centrifuge tube.
      11. It is recommended, at least for the first time, to determine the total protein concentration. If not, then it is recommended to run a lysate titration starting at 10uL sample + 15uL of Assay Buffer 1 and performing a 1:1 serial dilution in Assay Buffer 1.

      For the Custom assay, the optimal total protein concentration was found to be 2 to 6 mg/mL. Additionally, it was determined that 10uL of Lysis Buffer per 1 million PBMC cells yields approximately 2 mg/mL, and adding 10uL of this 2mg/mL sample plus 15uL of Assay Buffer yielded good results. It is advised not to dilute samples in Lysis Buffer; rather, dilute in Assay Buffer 1, which lacks strong detergents. If needed, the amount of Lysis Buffer per PBMC cells can be adjusted, for example, by increasing it to 10uL of Lysis Buffer per 2 million PBMC cells.

      Utile ?

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