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Species-dependent binding of tocainide analogues to albumin: affinity chromatography and circular dichroism study.

Journal of chromatography. B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences (2014-01-30)
Marco Pistolozzi, Cecilia Fortugno, Carlo Franchini, Filomena Corbo, Marilena Muraglia, Myriam Roy, Guy Félix, Carlo Bertucci
RESUMEN

A series of novel tocainide analogues were characterized for their HSA and RSA binding, by using high-performance liquid affinity chromatography (HPLAC) and circular dichroism (CD). In this HPLAC study, HSA and RSA were covalently immobilized to the silica matrix of HPLC columns, with a procedure that maintained unaltered the binding properties of the proteins. The tocainide analogues were ranked for their affinity to HSA and RSA on the basis of their bound fractions measured by the two albumin-based columns. This technique was also applied to characterize the high affinity binding sites of these tocainide analogues to the protein. For this purpose displacement experiments were carried out by means of increasing concentrations in the mobile phase of competitors known to bind selectively to the main binding sites of HSA. The results obtained with the immobilized proteins were confirmed by investigating the same drug-protein systems in solution by circular dichroism. The comparison of the data collected with both methodologies highlighted the dramatic effect of small differences in the amino acidic sequences of the two proteins. In fact, despite their similar primary and secondary structures, a small difference in the amino acidic sequence leads to significant differences in their three-dimensional structure reflecting their different binding capacity and their stereoselectivity. Therefore, this study confirms how it is crucial to consider the significant differences among the animal models when performing pharmacokinetic studies. It is also clear that the knowledge of serum carrier binding parameters at an early stage of drug discovery represents a great advantage that may help to save time and efforts.

MATERIALES
Referencia del producto
Marca
Descripción del producto

Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, ACS reagent, ≥99.0%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio dibasic, ACS reagent, ≥98%
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicina, ReagentPlus®, ≥99% (HPLC)
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Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicina, suitable for electrophoresis, ≥99%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, powder, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99.0%
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Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicina, BioUltra, for molecular biology, ≥99.0% (NT)
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ácido valproico sodium salt, 98%
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ibuprofen, ≥98% (GC)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Salicilato de sodio, ReagentPlus®, ≥99.5% (titration)
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicina, from non-animal source, meets EP, JP, USP testing specifications, suitable for cell culture, ≥98.5%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-Tryptophan, from non-animal source, meets EP, JP, USP testing specifications, suitable for cell culture, 99.0-101.0%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Bilirrubina, ≥98% (EmM/453 = 60), powder
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, for molecular biology, ≥98.0%
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
SAFC
Glicina
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio dibasic, anhydrous, for luminescence, for molecular biology, BioUltra, ≥99.0% (T)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-Tryptophan, BioUltra, ≥99.5% (NT)
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
USP
Ibuprofen, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Furosemide
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Potassium phosphate dibasic solution, 1.0 M
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
USP
Glicina, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ketoprofen, ≥98% (TLC)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Salicilato de sodio, 98.0-102.0% anhydrous basis, meets USP testing specifications
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicina, BioXtra, ≥99% (titration)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Supelco
Ibuprofen
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, BioUltra, for molecular biology, anhydrous, ≥99.5% (T)
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Bilirrubina, purum, ≥95.0% (UV)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, 99.99% trace metals basis
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-Tryptophan, reagent grade, ≥98% (HPLC)
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Phenylbutazone
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio dibasic, 99.95% trace metals basis
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad