SYBR Green qPCR is utilized to determine the relative silencing effect of specific shRNAs. The term "validated" refers to shRNA sequences that have been tested and confirmed effective in silencing. This validation involves testing in specific cell lines and measuring the mean knockdown level through lentiviral transduction. The evaluation of knockdown is conducted by measuring mRNA transcript levels post-lentiviral transduction with SYBR Green qPCR and comparing these levels to those achieved with the MISSION pLKO.1-puro Control Transduction Particles (SHC001V). For instance, a mean knockdown level of 0.90 indicates a 90% reduction at the mRNA level. Typically, validation does not extend to the protein level, as the primary target of shRNA is mRNA expression, which subsequently influences protein expression.
SHCLND
shRNA MISSION®
Purified DNA
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Acerca de este artículo
UNSPSC Code:
41106609
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General description
Nuestra completa oferta de productos shRNA (horquillas pequeñas de ARN) constan de más de 150 000 constructos de shRNA preclonados dirigidos a más de 15 000 genes humanos y 15 000 genes de ratón. Disponemos de una genoteca compuesta por conjuntos de familias de genes: colecciones de genes relacionadas con clases funcionales específicas, como las cinasas y los canales iónicos; conjuntos de genes específicos, conjuntos de clones de shRNA que se dirigen a su gen favorito; y clones de shRNA individuales. En nuestras plataformas de fabricación de shRNA y lentivirus se utilizan laboratorios específicos con sistemas robóticos de última generación, sistemas de manejo de la información del laboratorio (LIMS) y de manipulación de líquidos para proporcionar calidad y servicios superiores para sus requisitos de investigación con ARN de interferencia.
El formato de ADN plasmídico purificado MISSION® TRC que produce shRNA evita el lío de preparar ADN a partir de cada construcción. El ADN puede utilizarse directamente para transfección transitoria o estable. Además, estos plásmidos pueden combinarse con plásmidos de empaquetamiento en una línea celular de empaquetamiento para producir partículas lentivirales. Para cada construcción del conjunto diana se suministra 1 μg de ADN.
Application
El shRNA MISSION® se ha utilizado:
- en la generación de clones con atenuación de la ZO-1 (zonula occludens-1)
- para atenuar la expresión del LIF (factor inhibidor de la leucemia) en el modelo MCF10 isogénico
- para atenuar el factor nuclear eritroide 2 similar al 1 en células β pancreáticas MIN6
Other Notes
Para ver los protocolos y los datos de aplicación, visite sigma.com/shrna.
Legal Information
La utilización de este producto está sujeta a uno o más acuerdos de licencia.
MISSION is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Clase de almacenamiento
10 - Combustible liquids
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WGK 3
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How is the knockdown measured for validated shRNA clones?
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