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ChiPAb+ Monometil-histona H3 (Lys9): Conjunto de anticuerpo y cebador validado para CHIP

clone CMA306, from mouse, purified by using protein G

• Sinónimos: H3K9me1, Histone H3 (mono methyl K9)
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702
• Clone: CMA306, monoclonal
• Species reactivity: vertebrates, human
• Application: ChIP, IP, WB
• Citations: 7

Propiedades

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• antibody form: purified immunoglobulin
• clone: CMA306, monoclonal
• purified by: using protein G
• species reactivity: vertebrates, human
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable (ChIP-seq), immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q66I33
• shipped in: dry ice

Descripción

General description

Monometil-histona H3 en ~17 kDa

Todos los anticuerpos ChiPAb+ se validan individualmente para la precipitación de cromatina, en cada lote y en todo momento. Cada conjunto de anticuerpos ChiPAb+ incluye cebadores de control (probados en cada lote mediante qPCR) para validar biológicamente los resultados de IP en un contexto específico de locus. Se proporcionan el protocolo de qPCR y las secuencias de los cebadores, lo que permite a los investigadores validar los protocolos de ChIP al utilizar nuestro anticuerpo en su contexto de cromatina. Cada conjunto incluye también un anticuerpo de control negativo para garantizar la especificidad de la reacción de ChIP.
El conjunto ChiPAb+ monometil-histona H3 (Lys9) incluye el anticuerpo anti-monometil-histona H3 (Lys9), un anticuerpo de control negativo (IgG de ratón purificada) y cebadores para qPCR en la región codificadora de la GAPDH, amplificando un producto de PCR de 213 pares de bases. Los anticuerpos anti-monometil-histona H3 (Lys9) y controles negativos se suministran en un tamaño de reacción escalable «por ChIP» y pueden utilizarse para validar funcionalmente la precipitación de la cromatina asociada a la monometil-histona H3 (Lys9).

Immunogen

El anticuerpo anti-monometil-histona H3 (Lys9) purificado se elabora contra un péptido sintético (monometilado en la Lys9) que corresponde a los aminoácidos 1-18 de la histona H3.

Epítopo: aa 1-18

Application

Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear

Este conjunto de cebador y anticuerpo validado ChIPAb+ consta del anticuerpo, el anticuerpo de control negativo IgG emparejado y un conjunto de cebadores control para PCR que detectan un locus positivo conocido.

Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada partir de células HeLa (1 X 10⁶ equivalentes por IP) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 2 µl de IgG de ratón sano o anticuerpo anti-monometilhistona H3 (Lys9) y el kit Magna ChIP G (Nº de ref. 17-611). La inmunoprecipitación exitosa de fragmentos de ADN asociados a monometil-histona H3 (Lys9) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores de la región de codificación de la GAPDH frente a cebadores de control dirigidos contra la región promotora de la GAPDH (consulte las figuras). Los datos se presentan como porcentaje de entrada de cada muestra de IP en relación con la cromatina de entrada para cada amplicon y muestra ChIP, tal como se indica.
Consulte los detalles experimentales en el protocolo de EZ-Magna G ChIP (Nº de ref. 17-408) o EZ-ChIP (Nº de ref. 17-371).

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia:
Datos representativos del lote anterior. El extracto ácido de las HeLa (carril 1) se resolvió por electroforesis, se transfirió a la membrana de PVDF y se probó con anti-monometil histona H3 (Lys9) (0,5 μg/ml).
Las proteínas se visualizaron utilizando un anticuerpo secundario de cabra antirratón conjugado con HRP (Nº de ref. AP124P) y un sistema de detección de quimioluminiscencia (consulte las figuras).

Subcategoría de investigación
Biología de la cromatina

Biochem/physiol Actions

La secuencia del inmunógeno es idéntica en una amplia gama de especies animales y vegetales.

Reconoce la histona H3, Pm 17 kDa, monometilada en la Lys9.

Packaging

25 análisis por kit, ~2 μg por inmunoprecipitación de cromatina

Physical form

Anti-monometil-histona H3 (Lys9) (IgG2aқ monoclonal de ratón, clon CMA306). Un vial que contiene 50 μg de anticuerpo purificado en proteína G en 50 μl de PBS que contiene azida sódica al 0,05 %. Conservar a -20°C.

IgG de ratón sano. Dos viales que contienen 25 μg de IgG de ratón purificada en 25 μl de tampón de conservación que contiene azida sódica al 0,1 %. Conservar a -20°C.

Cebadores para ChIP Región de codificación de la GAPDH. Un vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador específico para una región de la región de codificación de la GAPDH humana. Conservar a -20°C.
DIR: GGC TCC CAC CTT TCT CAT CC
INV: GGC CAT CCA CAG TCT TCT GG

Preparation Note

Estable durante 1 año a -20°C desde la fecha de recepción. Distribuya en alícuotas al descongelar, evite ciclos de congelación y descongelación.

Analysis Note

Control
Incluido control negativo de anticuerpos IgG de ratón y control de cebadores específicos para región codificadora de la GAPDH humana.

Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada partir de células HeLa (1 X 10⁶ equivalentes por IP) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 2 µl de IgG de ratón sano o anticuerpo anti-monometil-Histona H3 (Lys9) y el kit Magna ChIP G (Nº de ref. 17-611). La inmunoprecipitación exitosa de fragmentos de ADN asociados a monometil-histona H3 (Lys9) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores ChIP de la región de codificación de la GAPDH (consulte las figuras).
Consulte los detalles experimentales en el protocolo EZ-Magna ChIP (Nº ref. 17-409) o EZ-CHIP (Nº ref. 17-371).

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• Clase de almacenamiento: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2