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D4693

Sigma-Aldrich

Dispasa® II

protease

Sinónimos:

Proteasa from Bacillus polymyxa

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About This Item

Número de CAS:
42613-33-2
Número CE:
255-914-4
Número MDL:
MFCD02253017
Código UNSPSC:
12352204
NACRES:
NA.54
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Nivel de calidad

100

Formulario

lyophilized solid

actividad específica

≥0.5 units/mg solid

técnicas

cell culture | mammalian: suitable
single cell analysis: suitable

solubilidad

10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble

temp. de almacenamiento

2-8°C

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Aplicación

La enzima de Sigma se ha utilizado en el desarrollo de un protocolo para el cultivo ex vivo de botones mamarios embrionarios de ratón.[1] Se ha utilizado en el tratamiento de fragmentos de corazón de rata durante el aislamiento de las mitocondrias del corazón de rata.[2] Se ha utilizado también para el aislamiento de células madre de la pulpa dental (DPSC) mediante hidrólisis enzimática. Estas células se han comparado con las DPSC aisladas mediante el método de explante para analizar sus propiedades de células madre y de diferenciación.[3]
La Dispase® II se ha utilizado para la clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS).[4] Se ha utilizado también para la separación de las capas del saco vitelino visceral.[5]
Adecuada para utilizar en la preparación de suspensiones monocelulares para secuenciación.

Acciones bioquímicas o fisiológicas

Dispase®II es una proteasa neutra que hidroliza los enlaces peptídicos N-terminales de restos de aminoácidos no polares. Puede utilizarse para separar muchos tejidos y células en crecimiento in vitro. La enzima es muy suave y no daña las membranas celulares. También puede utilizarse para evitar la aglutinación en los cultivos en suspensión. Esta proteasa escinde la fibronectina y el colágeno de tipo IV, pero no la laminina, el colágeno de tipo V, la seroalbúmina ni la transferrina.[6] Dispase® II es específica para la rotura de los enlaces leucina-fenilalanina. El Ca2+, el Mg2+, el Mn2+, el Fe2+, el Fe3+ y el Al3+ activan la enzima. El EDTA, el EGTA, el Hg2+ y otros metales pesados inhiben la actividad de la enzima.[7] La enzima contiene un átomo gramo de cinc por mol gramo de enzima purificada. Si se elimina el componente cinc con quelantes como el EDTA o el EGTA, se obtiene una apoenzima inactiva. La enzima no es inhibida por el suero.

Definición de unidad

Una unidad hidrolizará la caseína para producir color equivalente a 1,0 μmol (181 μg) de tirosina por minuto a pH 7,5 a 37 °C (color por el reactivo Folin-Ciocalteu, salvo que se indique otra cosa).

Forma física

polvo liofilizado que contiene acetato de calcio y lactosa

Nota de preparación

Puede prepararse una disolución de reserva de 50 U/ml mediante la disolución del polvo en un tampón que contenga NaAc 10 mM (pH 7,5) y CaAc 5 mM. Debe conservarse a 4 °C.

Nota de análisis

La enzima puede disolverse inicialmente en Hepes/KOH 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM a 10 mg/ml Deben realizarse más diluciones en los medios de cultivo celular más apropiados para que las células se disocien. La dispasa es una metaloproteinasa y es activada por cationes divalentes, como el Ca2+, el Mg2+, el Mn2+ y el Fe2+.

Información legal

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.

Pictogramas

Health hazardExclamation mark
GHS08,GHS07

Palabra de señalización

Danger

Frases de peligro

H315,H319,H334,H335

Clasificaciones de peligro

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

Órganos de actuación

Respiratory system

Código de clase de almacenamiento

11 - Combustible Solids

Clase de riesgo para el agua (WGK)

WGK 3

Punto de inflamabilidad (°F)

Not applicable

Punto de inflamabilidad (°C)

Not applicable

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Certificados de análisis (COA)

Lot/Batch Number
BCCM8755
BCCL2638
BCCM1253
BCCL7124
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Questions

1–5 of 5 Questions  

  1. Could I dissolve in another work solution instead Hepes/KOH 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM? 

    1 answer

    1. Two approaches are available for reconstituting this lyophilized enzyme formulation. The first approach is for making a solution used in cell dissociation, and the second is a more generic method, such as for assaying Dispase activity:

      1. Dissolve in 50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl at 10 mg/mL. Further dilutions should be made in the cell culture media most appropriate for the cells being dissociated.

      2. A 50 U/mL stock solution may be prepared by dissolving the powder in a buffer containing 10 mM sodium acetate (pH 7.5) and 5 mM calcium acetate.

      Helpful?

  2. how many units in 1 mg for the product D4693

    1 answer

    1. The enzymatic activity varies from lot to lot and is reported in the Certificate of Analysis. A brief survey of recent lots reveals an average activity of 1.2 u/mg solid. Please see the link below to review a sample or lot specific Certificate:
      https://www.sigmaaldrich.com/product/sigma/d4693*product-documentation

      Helpful?

  3. Once dissolved into a stock solution, how long is it stable at 4 degrees C?

    1 answer

    1. The reconstituted stock solution can be stored at 2 to 8 °C for 2 weeks. Alternatively, it can be stored at - 20 deg C in aliquots to minimize freeze-thaw cycles where it should be stable for up to 2 months. The working solution, diluted in PBS from the stock solution, is stable for approximately 3 days at 2 to 8 °C.

      Helpful?

  4. Is Dispase II esteril for isolating cells from tissues for doing cell cultures? Thanks Monica

    1 answer

    1. This product has been used in the ex vivo culture of mouse embryonic mammary buds. Please see protocols in the published article: https://link.springer.com/article/10.1007/s10911-013-9288-2

      Helpful?

  5. What is the Department of Transportation shipping information for this product?

    1 answer

    1. Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.

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