P8250

Peroxydase from horseradish

Type II, essentially salt-free, lyophilized powder, 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Synonyme(s) : Donneur : peroxyde d'hydrogène oxydoréductase, Peroxydase de raifort
• Numéro CAS: 9003-99-0
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-668-6
• Numéro MDL: MFCD00071339
• Code UNSPSC : 12352204
• eCl@ss : 32160410
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Source biologique: horseradish
• Niveau de qualité: 300
• Type: Type II
• Forme: essentially salt-free, lyophilized powder
• Activité spécifique: 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)
• Poids mol.: ~44 kDa
• Solubilité: 0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0); H₂O: soluble
• Rapport des absorbances: RZ ≥1.8
• Application(s): diagnostic assay manufacturing
• Température de stockage: 2-8°C
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• Clé InChI: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Description

Description générale

La peroxydase de raifort (HRP, de l′anglais horseradish peroxidase) est isolée des racines de raifort (Armoracia rusticana) et appartient au groupe des peroxydases de type ferroprotoporphyrine. La HRP est un polypeptide à une seule chaîne qui comporte quatre ponts disulfure. Il s′agit d′une glycoprotéine contenant 18 % de glucides. Selon l′isozyme, les glucides peuvent inclure les constituants suivants : galactose, arabinose, xylose, fucose, mannose, mannosamine et galactosamine. Le poids moléculaire de la peroxydase de raifort (env. 44 kDa) inclut la chaîne polypeptidique (33,890 Daltons), l′hémine plus Ca²⁺ (env. 700 Daltons) et les glucides (env. 9,400 Daltons). Au moins sept isozymes existent. Le point isoélectrique des isozymes de peroxydase de raifort se situe dans une plage de 3,0 à 0,9.

Application

Cette enzyme a été utilisée pour comparaison dans l′essai de la peroxydase sur des extraits de brins matures de fétuque des prés. Elle a également été employée pour mesurer la production d′H₂O₂.

La peroxydase de raifort (HRP) est isolée des racines de raifort (Armoracia rusticana). Elle est utilisée dans les applications biochimiques comme les analyses par western blots, ELISA et immunohistochimie. La peroxydase de raifort est utilisée pour amplifier un signal faible et pour faciliter la détection d′une molécule cible, par exemple une protéine. La peroxydase de raifort, produit P8250, a été utilisée pour étudier les antigènes non buccaux dans les gencives en présence d′inflammation ainsi que la toxicité de la glycoprotéine du virus Ebola.

Actions biochimiques/physiologiques

Lorsqu′elle est incubée en présence d′un substrat, la peroxydase de raifort produit un dérivé coloré, fluorimétrique ou luminescent qui permet la quantification. La peroxydase de raifort réduit légèrement le taux d′inhibition dans un mutant cydAB.

L′HRP se combine facilement au peroxyde d′hydrogène (H₂O₂) et le complexe [HRP-H₂O₂] qui en découle peut oxyder un vaste éventail de donneurs d′hydrogène. La plage de pH optimale est de 6,0-6,5 et l′enzyme est plus stable dans la plage de pH 5,0-9,0. L′HRP peut être conjuguée à des anticorps selon diverses méthodes, notamment au glutaraldéhyde, par oxydation au periodate, par des ponts disulfures et en utilisant des agents de réticulation amino et thiol. Elle est plus stable et plus petite que la β-galactosidase et la phosphatase alcaline, et constitue une étiquette enzymatique de prédilection. Sa glycosylation permet également de réduire la liaison non spécifique. Elle est couramment utilisée pour pour le dosage du glucose et des peroxydes dans une solution. Son activité enzymatique est inhibée par l′azoture de sodium, le cyanure, la L-cystine, le dichromate, l′éthylène-thiourée, l′hydroxylamine, le sulfure, le vanadate, l′acide p-aminobenzoïque et les ions Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺ et Pb²⁺ l.

Qualité

Des études préliminaires indiquent qu′elle contient au moins cinq isozymes.

Définition de l'unité

Une unité de pyrogallol forme 1,0 mg de purpurogalline à partir de pyrogallol en 20 sec à pH 6,0 et 20 °C.

Remarque sur l'analyse

La valeur RZ (Reinheitszahl) est le rapport d′absorbance A₄₀₃/A₂₇₅ mesuré à 0,5-1,0 mg/ml dans de l′eau désionisée. C′est une mesure de la teneur en hémine, plutôt que de l′activité enzymatique. Il est possible que des préparations présentant une valeur RZ élevée aient une faible activité enzymatique.

Autres remarques

Pour en savoir plus sur la peroxydase, rendez-vous sur www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H334
• Conseils de prudence: P261 - P284 - P501
• Classification des risques: Resp. Sens. 1
• Code de la classe de stockage: 13 - Non Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Équipement de protection individuelle: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)