MAB369

Anticorps anti-transporteur de la dopamine (extrémité N-terminale), clone DAT-Nt

culture supernatant, clone DAT-Nt, Chemicon^®

• Synonyme(s) : DAT
• Code UNSPSC : 12352203
• eCl@ss : 32160702
• Nomenclature NACRES : NA.41

Propriétés

• Source biologique: rat
• Niveau de qualité: 100
• Forme d'anticorps: culture supernatant
• Type de produit anticorps: primary antibodies
• Clone: DAT-Nt, monoclonal
• Espèces réactives: rat, human, mouse, monkey
• Fabricant/nom de marque: Chemicon^®
• Technique(s): immunocytochemistry: suitable; immunohistochemistry: suitable; western blot: suitable
• Isotype: IgG2aκ
• Numéro d'accès NCBI: NM_001044.3
• Numéro d'accès UniProt: Q01959
• Conditions d'expédition: dry ice
• Modification post-traductionnelle de la cible: unmodified
• Informations sur le gène: human ... SLC6A3(6531)

Description

Description générale

Le transporteur de la dopamine (DAT) transmembranaire est situé sur la terminaison nerveuse présynaptique ; il assure la dernière étape de la transmission dopaminergique en transportant la dopamine de la fente synaptique jusqu'au neurone dopaminergique (recaptage). Les voies dopaminergiques ont fortement été impliquées dans la récompense et la dépendance, la motivation, l'alcoolisme, le trouble du déficit de l'attention avec hyperactivité (TDAH), et les maladies dégénératives du système moteur telles que la maladie de Parkinson, la maladie de Huntington et la chorée.

Spécificité

Reconnaît l'extrémité N-terminale du transporteur de la dopamine. Ne présente aucune réactivité croisée vis-à-vis des transporteurs de la sérotonine et de la norépinéphrine, de structures proches (Miller, 1997). L'immunolocalisation du DAT sur des coupes de cerveau humain congelées et fixées au paraformaldéhyde avec l'anticorps MAB369 ne montre aucun marquage ponctué dans le noyau caudé, le putamen et le noyau accumbens (Miller, 1997).

Immunogène

Extrémité N-terminale du transporteur de la dopamine humain fusionnée à de la glutathion S-transférase.

Épitope : extrémité N-terminale

Application

Cet anticorps anti-transporteur de la dopamine (extrémité N-terminale), clone DAT-Nt, est validé pour la détection du transporteur de la dopamine en IC, IH et WB.

Domaine de recherche
Neurosciences

Sous-domaine de recherche
Canaux ioniques et transporteurs

Western blotting : Reconnaît une bande diffuse aux environs de 70-85 kDa lors de l'analyse par western blotting d'extraits (20 µg de protéine totale) de noyau caudé, de putamen et de noyau accumbens.

Immunohistochimie : Tissu fixé avec 4 % de paraformaldéhyde (attention à ne pas trop fixer le tissu) ; perfusion suivie d'un repos post-fixation de moins de 90 minutes, puis cryoprotection. Dilution de travail suggérée : 1/1 000-1/10 000. En cas d'application sur du tissu de rat, il est recommandé d'utiliser des anticorps secondaires anti-rat absorbés, et l'emploi de systèmes PAP de rat ou une détection reposant sur la méthode ABC améliorera la sensibilité.

Immunocytochimie : 1/5 000 à 1/10 000.

Immunoblotting (utilisation non recommandée sur le rat)

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail et les protocoles optimaux.



PROTOCOLE D'IMMUNOHISTOCHIMIE POUR LA RÉFÉRENCE MAB369

Cet anticorps a été utilisé avec succès sur du tissu cérébral de souris de 30 μm, fixé avec 4 % de paraformaldéhyde, et flottant librement. Toutes les étapes doivent être réalisées sous agitation constante. Suggestion de protocole :

1) 3 lavages de 10 minutes chacun dans du TBS (avec ou sans 0,25 % de Triton).

2) Incubation pendant 30 minutes dans du TBS contenant 3 % de sérum (de la même espèce que l'hôte de l'anticorps secondaire).

3) Incubation de l'anticorps primaire convenablement dilué dans du TBS contenant 1 % de sérum (de la même espèce que l'hôte de l'anticorps secondaire) (avec ou sans 0,25 % de Triton) pendant 2 heures à température ambiante puis pendant 16 heures à 4 °C.

4) 3 lavages de 10 minutes chacun dans du TBS.

5) Incubation avec l'anticorps secondaire convenablement dilué dans du TBS contenant 1% de sérum (de la même espèce que l'hôte de l'anticorps secondaire).

6) 3 lavages de 10 minutes chacun dans du TBS.

7) ABC Elite (de Vector Labs, dilution au 1/200e) dans du TBS.

8) 2 lavages de 10 minutes chacun dans du TBS.

9) 1 lavage de 10 minutes dans du tampon phosphate (non salin).

10) Réaction avec de la DAB après ajout de 0,06 % de NiCl pour intensifier la réaction.

11) 2 lavages de 10 minutes chacun dans du PBS.

12) 1 lavage de 10 minutes dans du tampon phosphate (non salin).

Description de la cible

70-85 kDa

Forme physique

Produit non purifié

Surnageant de culture tissulaire non purifié, filtré sur une membrane de 0,2 μm avant mise en flacon. Le produit contient 20 % de FBS et de la ciprofloxacine à une concentration finale de 10 μg/ml.

Stockage et stabilité

À conserver à -20 °C pendant 1 an à compter de la date d'expédition. À diviser en aliquotes pour éviter les congélations et décongélations répétées. Pour récupérer le maximum de produit, centrifuger le flacon d'origine après décongélation et avant de retirer le capuchon.

Remarque sur l'analyse

Témoin
Témoin positif : Tissu cérébral (noyau caudé, putamen et noyau accumbens)

Autres remarques

Lauréat du prix CiteAb 2024 récompensant les avancées dans la recherche sur la maladie de Parkinson

Informations légales

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 10 - Combustible liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable