Technique ELISA
Généralement réalisés sur des plaques de microtitrage multipuits, les tests ELISA (de l'anglais "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay") sont des dosages de biologie moléculaire couramment utilisés pour la détection et la quantification de diverses molécules, notamment les peptides, les protéines et les anticorps. Ces tests permettent de détecter des molécules d'intérêt en concentrations de l'ordre du picogramme par millilitre et ils revêtent une importance cruciale pour les applications de la recherche fondamentale et de la recherche sur des maladies.
Technique ELISA : interactions anticorps/antigène
Les composants moléculaires clés d'un test ELISA incluent généralement un anticorps conjugué à une enzyme, une ou plusieurs molécules d'intérêt immobilisées et un substrat de détection. L'un des aspects déterminants de la réussite et de la qualité des données d'un test ELISA est l'affinité et la spécificité des interactions anticorps/antigène. Ces interactions antigène/anticorps sont influencées par de nombreux facteurs, dont le pH, la température et la force ionique.
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Formats de détection des tests ELISA
Les tests ELISA qui utilisent des techniques de détection directe ont besoin d'un antigène immobilisé qui est lié à la surface d'une microplaque soit directement soit indirectement par l'intermédiaire d'un anticorps de capture, puis d'un anticorps primaire spécifique de l'antigène conjugué à une enzyme, et enfin d'un substrat de détection.
Le format de détection indirecte plus couramment utilisé intègre un anticorps primaire non conjugué, suivi d'un anticorps secondaire conjugué qui est spécifique de la détection de l'anticorps primaire. La détection indirecte bénéficie d'une immunoréactivité accrue vis-à-vis de l'antigène cible, car l'enzyme conjuguée est uniquement présente sur l'anticorps secondaire.
En plus des formats de détection directe et indirecte, il existe des tests de capture ou tests "en sandwich" qui utilisent d'abord un anticorps de capture d'antigène supplémentaire lié à la surface de la microplaque, suivi d'un anticorps primaire et d'un anticorps secondaire conjugué à une enzyme comme dans la technique indirecte décrite précédemment.
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