P8044

Proteinase K aus Tritirachium album

≥3.0 unit/mg solid, lyophilized powder

• Synonym(e): Endopeptidase K
• CAS-Nummer: 39450-01-6
• EC-Nummer: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 254-457-8
• MDL-Nummer: MFCD00132129
• UNSPSC-Code: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Biologische Quelle: maize; microbial (T.album; T. ALBUM); plant seeds (barley); soybean; yeast
• Qualitätsniveau: 200
• Form: lyophilized powder
• Spezifische Aktivität: ≥3.0 unit/mg solid
• Mol-Gew.: 28.93 kDa
• Zusammensetzung: Protein, ≥15% biuret
• Methode(n): DNA extraction: suitable
• Anwendung(en): diagnostic assay manufacturing
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Anwendung

Das Enzym von Sigma wird zur Degradierung von Komplex I (NADH:Ubichinon-Oxidoreduktase) vor der Extraktion von Ubichinon aus Yarrowia lipolytica eingesetzt. [1] Es wird zur Untersuchung der Wirkung von Proteinase K auf Pythium ultimum eingesetzt.[2] Es wird außerdem zur Maximierung der Anzahl von in der Sediment-Aufschlämmung hydrolysierten Peptidbindungen ohne autolytische Herstellung von Aminosäuren vom Enzym selbst verwendet.[3]

Nützlich zur proteolytischen Inaktivierung von Nukleasen bei der Isolierung von DNA und RNA.
Entfernt Endotoxine, die an kationische Proteine wie Lysozym und Ribonuklease A binden.
Berichten zufolge nützlich für die Isolierung von Leber-, Hefe- und Mungbohnen-Mitochondrien
Bestimmung der Enzymlokalisierung auf Membranen
Behandlung von Paraffinschnitten zur Freilegung von Antigenbindungsstellen zur Antikörpermarkierung.
Verdauung von Proteinen aus Hirngewebeproben für Prionen in der TSE-Forschung.

Proteinase K ist zur proteolytischen Inaktivierung von Nukleasen bei der Isolierung von DNA und RNA geeignet. Sie wird zur Beseitigung von Endotoxinen verwendet, die an kationische Proteine wie Lysozyme und Ribonuklease A gebunden sind. Sie ist zur Isolierung von Mitochondrien aus Leber, Hefe und Mungbohnen geeignet und dient dazu, die Lokalisierung von Enzymen auf Membranen zu bestimmen. Sie wird außerdem zur Behandlung von Paraffinschnitten genutzt, um die Antigenbindungsstellen für die Antikörpermarkierung freizulegen, sowie für den Proteinverdau in Gehirngewebeproben. Produkt P8044 wird als lyophilisiertes Pulver[4] geliefert.

Proteolytische Deaktivierung von Nucleasen während der Isolation von DNA und RNA

Biochem./physiol. Wirkung

Proteinase K ist eine stabile und hochreaktive Serinprotease. Ergebnisse von Kristall- und Molekularstrukturstudien lassen darauf schließen, dass das Enzym zur Subtilisin-Familie mit einer katalytischen Triade (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴) im aktiven Zentrum gehört. Es ist in einer Reihe von Umgebungen stabil: pH, Puffersalze, Detergenzien (SDS) und Temperatur. In Gegenwart von 0,1–0,5 % SDS bleibt Proteinase K aktiv und verdaut zahlreiche Proteine und Nukleasen in DNA-Präparationen, ohne die Integrität der isolierten DNA zu beeinträchtigen.

Proteinase K ist gegenüber nativen Proteinen hochgradig aktiv. Sie weist eine breite Spezifität auf und baut viele Proteine selbst im nativen Zustand ab. In erster Linie spaltet sie die Peptidbindung nahe der Carboxylgruppe von aliphatischen und aromatischen Aminosäuren mit blockierten α-Aminogruppen.[5][6][7] Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7,5 und 9,0[5][6] und der isoelektrische Punkt bei 8,9.[5] Ca²⁺ (1‑5 mM) ist für ihre Aktivierung erforderlich. Proteinase K wird von Diisopropylfluorphosphat (DIFP) oder Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF) gehemmt.[6]

Einheitendefinition

Eine Einheit hydrolysiert harnstoffdenaturiertes Hämoglobin und erzeugt eine Färbung, die 1,0 μmol Tyrosin pro Minute bei einem pH-Wert von 7,5 und 37 °C (Farbe vom Folin-Ciocalteu-Reagens) entspricht.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS07
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H315,H319,H334,H335
• P-Sätze: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Gefahreneinstufungen: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Zielorgane: Respiratory system
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves