MAB5290
Anti-Dopamin-D1A-Rezeptor-Antikörper, Klon SG2-D1a
clone SG2-D1a, Chemicon®, from mouse
About This Item
Empfohlene Produkte
Biologische Quelle
mouse
Antikörperform
purified immunoglobulin
Antikörper-Produkttyp
primary antibodies
Klon
SG2-D1a, monoclonal
Speziesreaktivität
mouse, sheep, rat
Darf nicht reagieren mit
pig, rabbit, human, bovine, canine
Hersteller/Markenname
Chemicon®
Methode(n)
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
Isotyp
IgG2b
NCBI-Hinterlegungsnummer
UniProt-Hinterlegungsnummer
Versandbedingung
wet ice
Posttranslationale Modifikation Target
unmodified
Angaben zum Gen
human ... DRD1(1812)
Spezifität
Immunogen
Anwendung
Neurowissenschaft
Neurotransmitter & Rezeptoren
Immunhistochemie: In 4 % PFA fixierte Vibratomschnitte, blockiert mit 3 % NGS, 1 % BSA mit 0,2 % Triton X-100. Nur in PBS mit überschüssigen Blockierungsreagenzien verdünnte Primärantikörper.
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Anwender bestimmt werden.
VORGESCHLAGENES WESTERN-BLOT-PROTOKOLL
Lösungen
10X Transferpuffer 1 Liter
Tris 115,3 g
Glycin 24,2 g
[SDS 4 g (kann weggelassen werden)]
Für eine 1X-Arbeitslösung: 1 Liter
mischen mit 700 ml Wasser
200 ml MeOH
100 ml 10X Transfer-TBST
Stammlösung 1 Liter
1 mol/l Tris pH-Wert 7,5 10 ml
5 mol/l NaCl 30 ml
10 % Tween-20 5 ml
1. SDS-PAGE-Gel wie gewünscht laufen lassen.
2. PVDF-Membran (ImmobilonP von Millipore) 1–2 Minuten in 100%igem Methanol eintauchen, um die Membran zu benetzen.
3. Membran in Transferpuffer (siehe nachstehend) eintauchen, bis sie für das Einrichten des Blot-Transfers bereit ist (>15 min).
4. Geltransfer-Sandwich mit dem Blot zur positiven Elektrode einrichten.
5. Protein vom Gel auf die Membran übertragen, bei 100 Volt 1–2 Stunden für Proteine mit niedrigen Molekülmassen oder 65 mA für 16 Stunden (über Nacht) für einen vollständigen Transfer von Proteinen mit höherer Molekülmasse.
6. Die übertragenen Banden mit Chemicon BLOT-FastStain (Katalognr. 2076) färben.
7. Mit entionisiertem Wasser entfärben.
8. Mit 5 % fettfreier Milch (Marvel oder Carnation) in TBS oder PBS über Nacht bei 4 °C blockieren. Die fettfreie Milch sollte frisch gelöst, bei 10.000 U/min für 10 min zentrifugiert und durch einen Glasfilter (Gelman Acrodisc) filtriert werden.
9. Inkubieren mit dem ersten Antikörper über Nacht bei sanftem Rühren und 4 °C.
Optimale Arbeitsverdünnungen und Inkubationszeit müssen vom Anwender bestimmt werden.
10. Mindestens 3 x 5 min mit TBST waschen. Ab diesem Schritt sollte Azid weggelassen werden.
11. Inkubieren mit dem Sekundärantikörper (an HRP konjugierter Anti-Maus-Antikörper der Ziege, z. B. Chemicon Katalognr. AP124P, geeignet verdünnt) für 1 Std. bei Raumtemperatur.
12. Mindestens 3 x 5 min mit TBST waschen.
13. ECL mit einem im Handel erhältlichen Kit (femtoLUCENT, Chemicon Katalognr. 2078) durchführen.
Physikalische Form
Lagerung und Haltbarkeit
Sonstige Hinweise
Rechtliche Hinweise
Haftungsausschluss
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Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
WGK
WGK 2
Flammpunkt (°F)
Not applicable
Flammpunkt (°C)
Not applicable
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