COLLD-RO

Colagenasa D

from Clostridium histolyticum

• Comisión internacional de enzimas: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC Code: 12352204

Propiedades

• biological source: Clostridium histolyticum
• Quality Level: 100
• sterility: non-sterile
• form: lyophilized
• collagenase activity: >0.15 U/mg lyophilizate
• packaging: pkg of 100 mg (11088858001); pkg of 2.5 g (11088882001); pkg of 500 mg (11088866001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: (working concentration: 0.5 - 2.5 mg/ml)
• technique(s): tissue processing: suitable
• color: light brown
• optimum pH: 6.0-8.0
• solubility: water: soluble
• NCBI accession no.: WP_171012037
• application(s): cell analysis
• foreign activity: Clostripain 0.060 U/mg; Proteases 8 U/mg ( Azocoll); Trypsin <0.2 U/mg (with BAEE)
• storage temp.: 2-8°C

Descripción

General description

La colagenasa D se prepara a partir de cultivos de Clostridium histolyticum mediante filtración, precipitación de sulfato de amonio, diálisis y liofilización.

Specificity

La colagenasa degrada el colágeno nativo. La clostripaína, las enzimas tripsinoides y las proteasas neutras degradan también otras proteínas.

Application

La colagenasa de C. histolyticum se utiliza ampliamente para la desagregación de muchos tipos de tejidos (por ejemplo, pulmón, corazón, músculo, hueso, tejido adiposo, hígado, riñón, cartílago, glándula mamaria, placenta, vasos sanguíneos, cerebro, tumores) y para la preparación de suspensiones de células individuales para el establecimiento de sistemas de cultivo celular primario. Se recomienda la colagenasa D cuando son importantes la funcionalidad y la integridad de las proteínas de superficie celular.
La colagenasa de Clostridium de Roche se ha utilizado para preparar células de muchos tipos de tejido, como hepatocitos, adipocitos, islotes pancreáticos, células epiteliales, células musculares, células endoteliales, etc. Sin embargo, debe determinarse empíricamente la idoneidad de cada lote de la enzima para la ruptura de un tejido concreto.

Features and Benefits

Contenido
Liofilizada, no estéril

Unit Definition

La colagenasa de Roche se valora en unidades Wünsch (1 μmol de producto formado por minuto a +25 °C con sustrato Wünsch).
A menudo, las actividades colagenasa se dan en unidades Mandl (1 μl de leucina liberada del colágeno en 5 horas a +37 °C).
Por desgracia, no hay un factor de conversión uniforme entre las dos unidades de actividad, ya que la unidad Mandl depende en parte de la concentración de las proteasas contaminantes en la preparación de colagenasa, una variable indefinible. Una preparación de colagenasa más pura daría de hecho una menor actividad específica en unidades Mandl que una preparación bruta. Las preparaciones de Clostridium dan normalmente factores de conversión de aproximadamente 1:1800 (por ejemplo, un lote concreto de colagenasa de Clostridium contenía aproximadamente 0,15 U Wünsch/mg y 250 U Mandl/mg).

Physical form

Liofilizada, no estéril.

Preparation Note

Activador: Ca²⁺
Concentración de trabajo: 0,5 – 2,5mg/ml
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): entre -15 y -25°C
Roche recomienda reconstituir sólo la cantidad de liofilizado necesario para uso inmediato. La disolución reconstituida puede conservarse entre -15 y -25°C durante un máximo de una semana. Evite la congelación y descongelación repetidas ya que la actividad disminuye después de la reconstitución.

Inhibidores:
Inhibidores de la colagenasa: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoetanol
La colagenasa no es inhibida por el suero.
Inhibidores de la clostripaína: TLCK
Inhibidores de la tripsina: aprotinina, inhibidor de la tripsina (clara de huevo, soja)

Actividad enzimática:
Actividad de la colagenasa: >0,15 U/mg (según Wünsch) (+25°C, 4-fenilazobenciloxicarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg como sustrato)
Actividades enzimáticas contaminantes: tripsina, clostripaína y actividad proteolítica total
La colagenasa D tiene una actividad colagenasa de normal a elevada y una baja actividad tríptica (normalmente <0,2 unidades/mg, BAEE como sustrato).

Reconstitution

Reconstitución en cualquier disolución salina equilibrada (por ejemplo, HBSS)

Storage and Stability

Manténgalo alejado de la luz.

Other Notes

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.

Información de seguridad

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H315 - H319 - H334 - H335
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Storage Class: 11 - Combustible Solids
• wgk_germany: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
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