TR-1001
Reactivo de selección GPT, ácido micofenólico x500; aminopterina x100
The Mycophenolic Acid is an antibiotic useful in research for the selection of animal cells that express the E. coli.
Sinónimos:
MPA & Aminopterin solution
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About This Item
Código UNSPSC:
12352207
eCl@ss:
32160801
NACRES:
NA.71
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Nivel de calidad
Formulario
liquid
fabricante / nombre comercial
Specialty Media
entrada
sample type: mouse embryonic stem cell(s)
Condiciones de envío
dry ice
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Descripción general
El ácido micofenólico es un antibiótico útil en investigación para la selección de células animales que expresan el gen de E. coli que codifica la XGPRT (xantina guanina fosforribosiltransferasa). El ácido micofenólico se utiliza también como inmunodepresor porque actúa inhibiendo la proliferación de linfocitos y la producción de anticuerpos.
Las células transfectadas con el gen GTP de E. coli pueden seleccionarse para el crecimiento en medio que contenga el reactivo de selección GPT.
Cada kit contiene:
• 500 x ácido micofenólico con ETOH (12,5 mg/ml) 2 viales de 1 ml
• 1 botella (10 ml) de disolución de aminopterina x100 que consiste en:
- xantina 25 mg/ml
- hipoxantina: 1,5 mg/ml
- aminopterina: 0,2 mg/ml
- timidina: 1 mg/ml
- en NaOH 0,08 M
Las células transfectadas con el gen GTP de E. coli pueden seleccionarse para el crecimiento en medio que contenga el reactivo de selección GPT.
Cada kit contiene:
• 500 x ácido micofenólico con ETOH (12,5 mg/ml) 2 viales de 1 ml
• 1 botella (10 ml) de disolución de aminopterina x100 que consiste en:
- xantina 25 mg/ml
- hipoxantina: 1,5 mg/ml
- aminopterina: 0,2 mg/ml
- timidina: 1 mg/ml
- en NaOH 0,08 M
Aplicación
1. Sembrar aproximadamente 106 células en placas de cultivo de 100 mm en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) que contenga 5 % de suero fetal de ternera y penicilina o estreptomicina, y dejar crecer durante 24 horas.
2. Transfectar el cultivo con 10-20 μg de ADN plasmídico EcoGPT.
3. Después de 3 días a 37°C en DMEM que contenga un 5 % de suero fetal, digerir con tripsina las monocapas celulares y dispersar 5 x 105 células en placas de cultivo frescas de 100 mm en DMEM que contenga un 10 % de suero fetal dializado enriquecido con las disoluciones de MPA y aminopterina. Esto dará una disolución final de aproximadamente: 250 μg/ml de xantina, 15 μg/ml de hipoxantina, 10 μg/ml de timidina, 2 μg/ml de aminopterina y 25 μg/ml de ácido micofenólico. El suero dializado se utiliza para acelerar el proceso de selección. La selección será más lenta con suero sin dializar.
4. Veinticuatro horas después, sustituir el medio con medio reciente que contenga los mismos suplementos y cambiar el líquido.
5. Repetir cada 3 días. Las colonias son visibles, normalmente, en 7 a 10 días.
Nota: también pueden utilizarse otras bases de medios como F12 de Ham. Depende mucho del tipo de célula que se esté utilizando.
2. Transfectar el cultivo con 10-20 μg de ADN plasmídico EcoGPT.
3. Después de 3 días a 37°C en DMEM que contenga un 5 % de suero fetal, digerir con tripsina las monocapas celulares y dispersar 5 x 105 células en placas de cultivo frescas de 100 mm en DMEM que contenga un 10 % de suero fetal dializado enriquecido con las disoluciones de MPA y aminopterina. Esto dará una disolución final de aproximadamente: 250 μg/ml de xantina, 15 μg/ml de hipoxantina, 10 μg/ml de timidina, 2 μg/ml de aminopterina y 25 μg/ml de ácido micofenólico. El suero dializado se utiliza para acelerar el proceso de selección. La selección será más lenta con suero sin dializar.
4. Veinticuatro horas después, sustituir el medio con medio reciente que contenga los mismos suplementos y cambiar el líquido.
5. Repetir cada 3 días. Las colonias son visibles, normalmente, en 7 a 10 días.
Nota: también pueden utilizarse otras bases de medios como F12 de Ham. Depende mucho del tipo de célula que se esté utilizando.
Almacenamiento y estabilidad
Conservar a -20°C.
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Palabra de señalización
Danger
Frases de peligro
Consejos de prudencia
Clasificaciones de peligro
Aquatic Chronic 2 - Muta. 2 - Repr. 1B - STOT RE 2 Oral
Órganos de actuación
Immune system
Código de clase de almacenamiento
6.1D - Non-combustible, acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 3
Punto de inflamabilidad (°F)
Not applicable
Punto de inflamabilidad (°C)
Not applicable
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