S7847
Kit de modificación con bisulfito CpGenome Turbo
The CpGenome Turbo Bisulfite Modification Kit is designed to simplify & streamline the bisulfite modification process. In just 90 minutes go from DNA sample to bisulfite converted DNA ready for analysis.
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About This Item
Código UNSPSC:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.25
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Nivel de calidad
fabricante / nombre comercial
Chemicon®
CpGenome
aplicaciones
genomic analysis
Condiciones de envío
ambient
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Descripción general
El kit de modificación con bisulfito CpGenome Turbo está diseñado para simplificar y agilizar el proceso de modificación con bisulfito. Este kit contiene todos los reactivos clave para la modificación con bisulfito con el fin de permitir la recuperación del ADN modificado en unos 90 minutos en comparación con las 3-16 horas necesarias con kits similares. En este enfoque rápido pero eficaz se emplea una mezcla patentada de reactivos de modificación para permitir tiempos de conversión más cortos. Esta mezcla única de reactivos permite la conversión completa de citosinas no metiladas a la vez que minimiza el daño al ADN "input". Después de la modificación, y la desulfonación, el ADN modificado se purifica y eluye usando las columnas de centrifugación proporcionadas, lo que proporciona un ADN purificado y modificado con bisulfito listo para ser utilizado en una amplia variedad de aplicaciones consecutivas.
Características fundamentales
Características fundamentales
- Muestra "input" a ADN modificado en 90 minutos
- Eficiencias de conversión del 99,9 %
- Eficaz con tan solo 1 ng de ADN de entrada
- Recuperación del ADN modificado en tan solo 25 microlitros
- Rendimiento comprobado en múltiples aplicaciones consecutivas
Se sabe que la metilación de citosinas situadas 5′ con respecto a la guanosina tiene un efecto profundo en la expresión de varios genes eucariotas. En las células sanas, la metilación se produce predominantemente en las regiones pobres en CG, mientras que las áreas ricas en CG, conocidas como islas CpG, permanecen sin metilar. Las excepciones son la metilación extensiva de las islas CpG asociada con la inactivación transcripcional de regiones reguladoras de genes sellados y genes en el cromosoma X inactivo de las hembras. Se ha documentado la metilación aberrante de las islas CpG normalmente no metiladas como un evento relativamente frecuente en células inmortalizadas y transformadas, y se ha asociado con la inactivación transcripcional de genes supresores de tumores definidos en cánceres humanos.
Se han desarrollado varios métodos para determinar el estado de metilación de las citosinas. Entre ellos, el uso de anticuerpos o dominios proteicos de unión a metilo, la digestión con enzimas de restricción sensibles a, insensibles a o dependientes de la metilación como en el escaneo genómico de puntos de referencia de restricción (RLGS), la hibridación de matrices de oligonucleótidos, la secuenciación del ADN genómico por bisulfito y la PCR específica de metilación (MSP).
La secuenciación del ADN genómico, aunque es muy laboriosa y requiere mucha mano de obra, ofrece un método de detección más universal. La MSP es una tecnología establecida para el control de la metilación génica anómala en secuencias génicas seleccionadas. Utilizando pequeñas cantidades de ADN, este procedimiento ofrece la detección sensible y específica de la 5-metilcitosina en los promotores. Se está explotando para definir la función de los genes supresores tumorales y para proporcionar una nueva estrategia para la detección temprana de tumores mediante el estudio del ADN procedente de tejidos y líquidos corporales.
El paso inicial de la secuenciación genómica por bisulfito y la MSP es realizar una modificación con bisulfito de la muestra de ADN. En la reacción con bisulfito, todas las citosinas no metiladas son desaminadas y sulfonadas, convirtiéndolas en uracilos, mientras que las 5-metilcitosinas permanecen inalteradas. Por lo tanto, la secuencia del ADN tratado variará dependiendo de si el ADN está originalmente metilado o no metilado. Además, las cadenas de ADN inicialmente complementarias ya no serán complementarias después de la conversión de la citosina. Los cebadores que vayan a utilizarse en MSP pueden diseñarse para amplificar específicamente o bien una hebra no metilada sensible a los bisulfitos o bien una hebra metilada resistente a los bisulfitos basadas en estas diferencias químicamente inducidas. Millipore ofrece una selección de kits CpG Wiz MSP para permitir el análisis específico de gen mediante MSP. Si desea más información sobre los kits CpG Wiz y la tecnología MSP Pulse aquí
Se han desarrollado varios métodos para determinar el estado de metilación de las citosinas. Entre ellos, el uso de anticuerpos o dominios proteicos de unión a metilo, la digestión con enzimas de restricción sensibles a, insensibles a o dependientes de la metilación como en el escaneo genómico de puntos de referencia de restricción (RLGS), la hibridación de matrices de oligonucleótidos, la secuenciación del ADN genómico por bisulfito y la PCR específica de metilación (MSP).
La secuenciación del ADN genómico, aunque es muy laboriosa y requiere mucha mano de obra, ofrece un método de detección más universal. La MSP es una tecnología establecida para el control de la metilación génica anómala en secuencias génicas seleccionadas. Utilizando pequeñas cantidades de ADN, este procedimiento ofrece la detección sensible y específica de la 5-metilcitosina en los promotores. Se está explotando para definir la función de los genes supresores tumorales y para proporcionar una nueva estrategia para la detección temprana de tumores mediante el estudio del ADN procedente de tejidos y líquidos corporales.
El paso inicial de la secuenciación genómica por bisulfito y la MSP es realizar una modificación con bisulfito de la muestra de ADN. En la reacción con bisulfito, todas las citosinas no metiladas son desaminadas y sulfonadas, convirtiéndolas en uracilos, mientras que las 5-metilcitosinas permanecen inalteradas. Por lo tanto, la secuencia del ADN tratado variará dependiendo de si el ADN está originalmente metilado o no metilado. Además, las cadenas de ADN inicialmente complementarias ya no serán complementarias después de la conversión de la citosina. Los cebadores que vayan a utilizarse en MSP pueden diseñarse para amplificar específicamente o bien una hebra no metilada sensible a los bisulfitos o bien una hebra metilada resistente a los bisulfitos basadas en estas diferencias químicamente inducidas. Millipore ofrece una selección de kits CpG Wiz MSP para permitir el análisis específico de gen mediante MSP. Si desea más información sobre los kits CpG Wiz y la tecnología MSP Pulse aquí
Aplicación
Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear
Epigenética y función nuclear
Para el diseño del cebador MSP, utilice el paquete de software MethPrime. Pulse aquí
Componentes
Reactivo de conversión bisulfito 1
Reactivo de conversión bisulfito 2
Diluyente del reactivo bisulfito
Tampón de unión al ADN
Tampón de lavado NT3 (concentrado)*
Tampón de elución NE
Columnas de purificación de ADN modificado
Tubos de recogida de 2 ml
*El tampón de lavado de ADN requiere la adición de etanol al 100 %
Reactivo de conversión bisulfito 2
Diluyente del reactivo bisulfito
Tampón de unión al ADN
Tampón de lavado NT3 (concentrado)*
Tampón de elución NE
Columnas de purificación de ADN modificado
Tubos de recogida de 2 ml
*El tampón de lavado de ADN requiere la adición de etanol al 100 %
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Danger
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