T1426

Trypsine from bovine pancreas

TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥10,000 BAEE units/mg protein

• Synonyme(s) : Serine Protease 1
• Numéro CAS: 9002-07-7
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-650-8
• Numéro MDL: MFCD00082094
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Source biologique: bovine pancreas
• Qualité: Proteomics Grade
• Forme: essentially salt-free, lyophilized powder
• Activité spécifique: ≥10,000 BAEE units/mg protein
• Poids mol.: 23.8 kDa
• Solubilité: hydrochloric acid: soluble 1 mM
• Application(s): diagnostic assay manufacturing
• Activité étrangère: Chymotrypsin ≤0.1 BTEE units/mg protein
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

Pour la digestion de peptides par la trypsine, utiliser un rapport trypsine/peptide d′environ 1/100 à 1/20. Ce produit est généralement utilisé pour détacher les cellules adhérentes d′une surface de culture. La concentration en trypsine nécessaire pour déloger les cellules de leur substrat dépend principalement du type de cellules et de l′ancienneté de la culture. La trypsine a également été utilisée pour remettre en suspension des cellules lors d′une culture cellulaire, en recherche protéomique pour la digestion de protéines et dans diverses digestions en gel. Parmi ses autres applications, on peut citer l′évaluation de la cristallisation par des techniques à base de membrane et la détermination du fait que les vitesses et les rendements de repliement des protéines peuvent être limités par la présence de pièges cinétiques.

Actions biochimiques/physiologiques

La trypsine clive les peptides du côté C-terminal des résidus de lysine et d′arginine. La vitesse d′hydrolyse de cette réaction diminue si l′un ou l′autre côté du site de clivage comporte un résidu acide, et l′hydrolyse est interrompue si un résidu de proline se trouve du côté carboxyle du site de clivage. L′activité trypsine est optimale à pH 7-9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amide des dérivés synthétiques des acides aminés. De l′EDTA est ajouté aux solutions de trypsine pour servir d′agent chélateur, afin de neutraliser les ions calcium et magnésium qui dissimulent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L′élimination de ces ions augmente l′activité enzymatique.

Les inhibiteurs de protéase à sérine, notamment le DFP, la TLCK, l′APMSF, l′AEBSEF et l′aprotinine, inhibent la trypsine.

Composants

La trypsine consiste en un polypeptide à chaîne unique de 223 acides aminés. Elle est produite par l′élimination de l′hexapeptide N-terminal du trypsinogène, qui est clivé au niveau de la liaison peptidique Lys-Ile. La séquence d′acides aminés est réticulée par 6 ponts disulfure. Il s′agit de la forme native de la trypsine, ou bêta-trypsine. La bêta-trypsine peut faire l′objet d′une autolyse, avec un clivage entre les résidus Lys-Ser pour produire l′alpha-trypsine. La trypsine est un membre de la famille des sérine protéases.

Attention

Les solutions dans 1 mM HCl sont stables pendant un an sous forme d′aliquotes conservées à -20°C. La présence de Ca²⁺ réduit également l′autolyse de la trypsine et maintient sa stabilité en solution. La trypsine conserve également la majorité de son activité dans une solution d′urée à 2,0 M, de guanidine HCl à 2,0 M ou de SDS à 0,1 % (p/v).

Définition de l'unité

Une unité de BAEE produit une A₂₅₃ de 0,001 par minute à pH 7,6 et à 25 °C lorsque le BAEE est utilisé comme substrat.

Notes préparatoires

Soluble dans 1 mM HCl à 1 mg/ml.
Ce produit est également traité par TPCK et dialysé. Le traitement à la L-1-tosylamido-2-phényléthyl chlorométhyl cétone (TPCK) réduit l′activité de chymotrypsine qui est normalement présente dans la trypsine.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08,GHS07
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H315,H319,H334,H335
• Conseils de prudence: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classification des risques: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organes cibles: Respiratory system
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Équipement de protection individuelle: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves