Pepsin activity is measured using ~2% hemoglobin (pH 2.0), with enzyme diluted to 0.01–0.05 mg/mL in 10 mM HCl and incubated for 10 min at 37°C. Please see the link below to review the entire protocol:
https://www.sigmaaldrich.com/US/en/technical-documents/protocol/protein-biology/enzyme-activity-assays/enzymatic-assay-of-pepsin
P7000
Pepsina
powder, ≥250 units/mg solid
Sinonimo/i:
Pepsina, Pepsina A
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Informazioni su questo articolo
Numero CAS:
UNSPSC Code:
12352204
eCl@ss:
42010127
EC Number:
232-629-3
NACRES:
NA.54
MDL number:
Specific activity:
≥250 units/mg solid
Biological source:
Porcine gastric mucosa
CHF 115.00
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I produttori di prodotti diagnostici devono utilizzare un prodotto con un diverso grado di purezza: SRE0001
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Permettici di aiutartibiological source
Porcine gastric mucosa
Quality Segment
form
powder
specific activity
≥250 units/mg solid
mol wt
35 kDa
UniProt accession no.
application(s)
diagnostic assay manufacturing
shipped in
wet ice
storage temp.
2-8°C
Gene Information
pig ... LOC396892(396892)
Application
La pepsina è una peptidasi usata per digerire le proteine ed è comunemente utilizzata nella preparazione dei frammenti Fab dagli anticorpi. La pepsina ottenuta dalla mucosa gastrica porcina è stata usata per idrolizzare campioni cervicali secchi nei topi. Il prodotto P7000 viene fornito in polvere ed è stato usato per trattare cellule epiteliali di carcinoma mammario felino[1].
La scissione con pepsina può essere utilizzata per produrre frammenti F(ab′)2 di anticorpi. pepsina su www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.
L'enzima prodotto da Sigma è stato utilizzato per simulare in vitro la digestione gastrica del merluzzo cotto. È stato utilizzato per simulare in vitro la digestione gastrica della pasta di cacao e degli integratori di fibra alimentare.[2] È stato inoltre utilizzato per aumentare la frazione di collagene solubile estraibile e per abbassare l'immunogenicità del collagene ottenuto da tessuto dermico bovino.[3]
Biochem/physiol Actions
Scissione preferenziale: residui idrofobi e aromatici nelle posizioni P1 e P1′. Scinde i legami Phe-Val, Gln-His, Glu-Ala, Ala-Leu, Leu-Tyr, Tyr-Leu, Gly-Phe, Phe-Phe e Phe-Tyr nella catena β dell′insulina.
L'enzima non effettua la scissione a livello dei legami di valina, alanina o glicina. Per la digestione a opera della pepsina si possono usare come substrati Z-L-tirosil-L-fenilalanina, Z-L-glutamil-L-tirosina, e Z-L-metionil-L-tirosina. La pepsina può essere inibita da peptidi contenenti diversi residui di fenilalanina[4]
La pepsina idrolizza solo i legami peptidici, non quelli delle ammidi o degli esteri. La pepsina scinde i peptidi che presentano un acido aromatico ai lati del legame peptidico. La suscettibilità all'idrolisi è aumentata anche dalla presenza di amminoacidi contenenti zolfo in prossimità del legame peptidico. La scissione a opera della pepsina avviene preferenzialmente sul lato carbossilico di fenilalanina e leucina e in misura minore, sul lato carbossilico dei residui di acido glutammico. Scinde i legami Phe-Val, Gln-His, Glu-Ala, Ala-Leu, Leu-Tyr, Tyr-Leu, Gly-Phe, Phe-Phe e Phe-Tyr nella catena β dell'insulina
La pepsina è il principale enzima proteolitico prodotto nello stomaco. Digerisce le proteine attraverso la scissione del legame peptidico
La pepsina è il principale enzima proteolitico prodotto nello stomaco. Digerisce le proteine attraverso la scissione del legame peptidico
Analysis Note
Il PH ottimale è compreso tra 2 e 4. Attivo in 4 M di urea e 3 M di guanidina HCl. Stabile a 60 °C. La pepsina viene inattivata irreversibilmente in presenza di pH 8,0 - 8,5.
Other Notes
Per maggiori informazioni sulla pepsina visitare il sito web www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer
Una unità produce un ΔA280 di 0,001 per minuto a pH 2,0 a 37 C, misurato come prodotti solubili in TCA usando emoglobina come substrato. (Volume finale = 16mL. Percorso luminoso = 1cm)
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|---|---|---|---|
| biological source Porcine gastric mucosa | biological source Porcine gastric mucosa | biological source - | biological source - |
| Gene Information pig ... LOC396892(396892) | Gene Information pig ... LOC396892(396892) | Gene Information pig ... LOC396892(396892) | Gene Information - |
| specific activity ≥250 units/mg solid | specific activity ≥3,200 units/mg protein | specific activity 1200-2400 U/mg | specific activity ≥2000 units/mg protein |
| form powder | form lyophilized powder | form powder | form lyophilized |
| application(s) diagnostic assay manufacturing | application(s) diagnostic assay manufacturing | application(s) - | application(s) - |
| UniProt accession no. | UniProt accession no. | UniProt accession no. | UniProt accession no. - |
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signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
target_organs
Respiratory system
Classe di stoccaggio
11 - Combustible Solids
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
ppe
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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Could you please provide further details on the method used to determine pepsin activity, including the hemoglobin concentration used as the substrate, the concentration and preparation conditions of the enzyme solution, and the incubation time at 37°C ？
1 answer-
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Is there a favoured solvent to dissolve Pepsin from Porcine Gastric Mucosa (P7000).
1 answer-
The recommended solubility of this product is 1 mg/mL in 0.01N HCl. Optimum pH is 2-4. Active in 4 M urea and 3 M guanidine HCl. This is stable at 60 °C. Pepsin is irreversibly inactivated at pH 8.0 - 8.5. Enzyme solution (pepsin) – Prepare a 1 mg/mL stock solution in cold (2-8°C) 10 mM HCl. If insoluble material is present, place the stock solution on ice until dissolved. If the pepsin has dissolved, or if insoluble material is still present, after 1 hour, further dilute the 1 mg/mL stock solution to 0.01–0.05 mg/mL with cold 10 mM HCl solution.
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How long can the enzyme be stored and mantain its activity?
1 answer-
This product does not contain an expiration date. It contains a recommended retest date of roughly two years after the quality release date. A recommended retest date is the period of time during which the product is expected to remain within established stability specifications, provided that it has been stored under defined conditions. After the Retest Date, product samples should be examined to ensure that the product is still in compliance with the established specifications. For more information you may access the "Product Dating Information" document under "ADDITIONAL USEFUL DOCUMENTS ABOUT OUR PRODUCTS" at the bottom of the Quality Services page with this link: https://www.sigmaaldrich.com/US/en/life-science/quality-and-regulatory-management/quality-services.
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Can I freeze stock solutions of Product P7000, Pepsin from porcine gastric mucosa (Pepsin A)?
1 answer-
Solutions of the enzyme at pH 4.4 should be stable at -20 °C for 2-3 months.
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
1 answer-
Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.
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I've seen the term "1:10000" used to define Product P7000, Pepsin from porcine gastric mucosa (Pepsin A). What does that mean?
1 answer-
A historical measurement of pepsin activity was the ratio of pepsin to coagulated egg white that the pepsin would digest. Thus 1:10,000 would refer to one part pepsin to 10,000 parts coagulated egg white. More recent analyses use hemoglobin as a substrate, in place of coagulated egg white.
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Product P7000, Pepsin from porcine gastric mucosa (Pepsin A), can be stored at room temperature, but other pepsins are stored in the cooler or freezer. Why is this?
1 answer-
This relates to autodigestion of pepsin. P7000 is a relatively "crude" pepsin, where other proteins that are present would be more likely digestion targets. With more purified pepsin, the risk of autodigestion increases, and storage at colder temperatures reduces that risk.
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