COLLA-RO

Collagenasi A

from Clostridium histolyticum

• UNSPSC Code: 12352204
• Numero CE: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Specific activity: >0.15 U/mg lyophilizate (Collagenase activity)
• Biological source: Clostridium histolyticum
• Concentration: 1 mg/mL (0.1%, w/v)

Proprietà

• biological source: Clostridium histolyticum
• sterility: non-sterile
• form: lyophilized
• specific activity: >0.15 U/mg lyophilizate (Collagenase activity)
• packaging: pkg of 100 mg (10103578001), pkg of 2.5 g (11088793001), pkg of 500 mg (10103586001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: 1 mg/mL (0.1%, w/v)
• color: brown
• optimum pH: 6.0-8.0
• solubility: water: soluble
• suitability: suitable for PCR
• NCBI accession no.: WP_138210331
• UniProt accession no.: A0A4U9RG91
• application(s): cell analysis; life science and biopharma; sample preparation
• foreign activity: Clostripain 9.489 U/mg, Proteases 6.067 U/mg (Azocoll ), Trypsin 0.144 U/mg (with BAEE)
• storage temp.: 2-8°C
• Gene Information: Clostridium histolyticum ... COLA_1(1668506084)

Descrizione

General description

La collagenasi è una proteasi che scinde la proteina a tripla elica chiamata collagene.[1] Il Clostridium histolyticum produce sei tipi di collagenasi: α, β, γ, δ, ε e λ. Esse agiscono sul tessuto connettivo e mostrano più reattività con la gelatina che con il collagene.[2] La collagenasi da Clostridium histolyticum ha un′attività molto forte e digerisce il collagene da entrambe le estremità, a temperature fino a 4-10 °C.[3]

Application

La collagenasi ottenuta da Clostridium histolyticum trova ampia diffusione per le seguenti applicazioni:

• per la disgregazione di vari tipi di tessuto (per esempio, polmonare, cardiaco, muscolare, osseo, adiposo, epatico, renale, cartilagineo, delle ghiandole mammarie, placentare, dei vasi sanguigni, cerebrale, tumorale, del cordone ombelicale)
• per la preparazione di sospensioni monocellulari per implementare sistemi di colture cellulari primarie.[4] Quando resa e vitalità sono importanti è consigliabile ricorrere alla collagenasi A.[5][6]
• per la preparazione di cellule da molti tipi di tessuto, come epatociti, adipociti, isole pancreatiche, cellule epiteliali, cellule muscolari e cellule endoteliali, ecc. Tuttavia, l′idoneità di ogni lotto di enzima per la disgregazione di un particolare tessuto deve essere determinata empiricamente.[7][8]

Biochem/physiol Actions

La collagenasi degrada il collagene nativo. Clostripaina, enzimi simili alla tripsina e proteasi neutre degradano anche altre proteine,
Attività enzimatica:
Attività della collagenasi: >0,15 U/mg (secondo Wünsch) (+25 °C, 4-fenil-azobenzil-ossicarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg come substrato)
Attività enzimatiche di contaminazione: tripsina, clostripaina e attività proteolitica neutrale.
La collagenasi A ha un rapporto equilibrato di attività enzimatiche.

Preparation Note

Attivatore: Ca²⁺
Inibitori:
Inibitori della collagenasi: EDTA, EGTA, Cis, His, DTT, 2-mercaptoetanolo
La collagenasi non è inibita dal siero.
Inibitori della clostripaina: TLCK
Inibitori della tripsina: aprotinina, inibitore di tripsina (albume di uovo, soia), siero
Concentrazione di lavoro: da 0,5 a 2,5 mg/mL
Condizioni di stoccaggio (soluzione di lavoro): da -15 a -25 °C
Roche raccomanda di ricostituire solo la quantità di liofilizzato necessaria per l′uso immediato. La soluzione ricostituita può essere conservata tra -15 e -25 °C per una settimana al massimo. Si raccomanda di evitare cicli ripetuti di congelamento/scongelamento perché l′attività diminuisce dopo la ricostituzione.

Ricostituzione in qualsiasi soluzione salina bilanciata (per es., HBSS)

Tenere il contenitore ben chiuso in luogo asciutto e ben ventilato.

Other Notes

Contenuto
Liofilizzato, non sterile

Definizione di unità: l′attività della collagenasi Roche è stimata in unità di Wünsch (1 μmole di prodotto formato per minuto a +25 °C con substrato di Wünsch).
Spesso le attività delle collagenasi sono espresse in unità di Mandl (1 μmole di leucina liberata dal collagene in 5 ore a +37 °C).
Purtroppo non esiste un fattore di conversione affidabile fra le due unità, perché l′unità di Mandl dipende in parte dalla concentrazione delle proteasi contaminanti nella preparazione della collagenasi e questa è una variabile indefinibile. L′attività specifica di una preparazione di collagenasi più pura sarebbe in realtà minore rispetto a quella di una preparazione grezza se espressa in unità di Mandl. Le preparazioni da Clostridium in genere mostrano fattori di conversione di circa 1:1800 (ad es, un particolare lotto di collagenasi da Clostridium conteneva circa 0,15 U/mg secondo Wünsch e 250 U/mg secondo Mandl).

Esclusivamente per ricerche life science. Non usare in procedure diagnostiche.

Disclaimer

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Informazioni sulla sicurezza

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash
• hcodes: H315,H319,H334,H335