ABS1513-I

Anti-fosfo-ubiquitina (Ser65)

from rabbit, purified by affinity chromatography

• Sinonimo/i: Ubiqutin, Ser65 phosphorylated, Ub, Ser65 phosphorylated
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Proprietà

• Origine biologica: rabbit
• Livello qualitativo: 100
• Forma dell’anticorpo: affinity isolated antibody
• Tipo di anticorpo: primary antibodies
• Clone: polyclonal
• Purificato mediante: affinity chromatography
• Reattività contro le specie: human
• Reattività contro le specie (prevista in base all’omologia): mouse (based on 100% sequence homology), guinea pig (based on 100% sequence homology), rat (based on 100% sequence homology), horse (based on 100% sequence homology), sheep (based on 100% sequence homology), bovine (based on 100% sequence homology), hamster (based on 100% sequence homology), nonhuman primates (based on 100% sequence homology)
• tecniche: immunocytochemistry: suitable; western blot: suitable
• N° accesso NCBI: NP_061828; NP_066289
• N° accesso UniProt: P0CG47
• Condizioni di spedizione: ambient
• modifica post-traduzionali bersaglio: phosphorylation (pSer65)
• Informazioni sul gene: human ... UBB(7314)

Descrizione

Descrizione generale

Nell'uomo l′ubiquitina è prodotta inizialmente come proteina precursore di 229 aa detta poliubiquitina-B (UniProt P0CG47) codificata dal gene UBB (ID Gene 7314) o come proteina precursore di 685 aa detta poliubiquitina-C (UniProt P0CG48) codificata dal gene UBC (ID Gene 7316). Le estremità C-terminali della poliubiquitina-B (Cys229) e della poliubiquitina-C (Val685) vengono rimossi a livello post-traduzionale; successivamente, ulteriori scissioni post-traduzionali producono copie multiple di molecole identiche: l'ubiquitina di 76 amminoacidi (nota anche come proteina non istonica ad alta mobilità HMG-20) (tre copie per la poliubiquitina-B e nove copie per la poliubiquitina-C). Le modifiche covalenti delle proteine bersaglio attraverso diversi residui Lys di Ub sono eventi ben documentati durante la riparazione del DNA cellulare, la degradazione associata al RE (ERAD), l'attivazione della trascrizione, la degradazione lisosomiale e proteasomiale. PINK1 (chinasi 1 putativa indotta da PTEN) è una Ser/Thr chinasi che si accumula specificamente nei mitocondri depolarizzati, dove agisce come regolatore positivo dell'attività della E3-ubiquitin (Ub) ligasi parkina (Park2) fosforilando l'Ub alla Ser65 e il corrispondente residuo di Ser nel dominio N-terminale Ub-simile (UBL) della parkina. L'Ub fosforilata interagisce in modo allosterico con la parkina fosforilata nel suo dominio GINGO0, inducendo un cambiamento di conformazione ed esponendo la cisteina catalitica del dominio RING2 della parkina per una piena attività ligasica. Lo studio conformazionale mediante tecnica NMR rivela che in soluzione l'Ub fosforilata alla Ser65 esiste in due conformazioni. La conformazione principale mostra proprietà di superficie alterate, mentre la seconda conformazione di fosfo-Ub presenta una coda C-terminale retratta di due residui nel nucleo di Ub. La fosforilazione di Ub alla Ser65 ha uno scarso effetto sul trasferimento di Ub da E1 a E2 e influisce principalmente sul rilascio di Ub dagli enzimi E2 per formare catene di poli-Ub. Inoltre, la maggior parte delle deubiquitinasi (DUB), tra cui USP8, USP15 e USP30, mostrano una ridotta attività nei confronti della poli-fosfoUb legata in Lys63.

Specificità

Prevista reattività crociata con un'ampia gamma di specie sulla base del 100% di omologia di sequenza.

Questo anticorpo policlonale rivela solo l'ubiquitina (Ub) fosforilata alla Ser65 e le proteine ubiquitinate (comprese le oligo-Ub e le poli-Ub) contenenti ubiquitina fosforilata alla Ser65. Nessuna reattività verso l′Ub o le proteine ubiquitinate in assenza di fosforilazione della Ub alla Ser65.

Immunogeno

Peptide lineare coniugato con KLH corrispondente alla sequenza della regione bersaglio dell'ubiquitina contenente la Ser65 fosforilata.

Applicazioni

Analisi immunocitochimica: un lotto rappresentativo diluito 1:500 ha rilevato la fosforilazione dell'ubiquitina alla Ser65 indotta dal trattamento con CCCP (N° Cat. 215911) in cellule HeLa che esprimono PINK1.

Saggio di Western blotting: un lotto rappresentativo diluito 1:5.000 ha rilevato la fosforilazione catalizzata da GST-PINK1 alla Ser65 dell'ubiquitina ricombinante.

Analisi immunocitochimica: un lotto rappresentativo diluito 1:200 ha rivelato la fosfo-ubiquitina (Ser65) in cellule HeLa che esprimono PINK1 senza e con trattamento con CCCP. (Per gentile concessione del Dr. Noriyuki Matsuda).

Rileva la fosforilazione alla Ser65 dell'ubiquitina con questo anticorpo policlonale di coniglio anti-fosfo-ubiquitina (Ser65), N° Cat. ABS1513-I, convalidato per immunocitochimica e Western blotting.

Qualità

Valutata mediante Western blotting su cellule HeLa che esprimono la PINK1.

Saggio di Western blotting: questo anticorpo diluito 1:1.000 ha rilevato l'induzione cellulare della fosforilazione dell′ubiquitina alla Ser65 in 10 µg di lisato di cellule HeLa che esprimono la PINK1 in seguito a trattamento con CCCP (N° Cat. 215911).

Descrizione del bersaglio

Circa 17/ 8 e circa 45-250 kDa, osservati. 8,565/17,112/25,66/34,21 kDa (mono-/di/tri-/tetra-ubiquitina), calcolati. Le bande di circa 45-250 kDa rappresentano proteine ubiquitinate che contengono Ub fosforilata alla ser65. In alcuni lisati si possono osservare bande non caratterizzate.

Linkage

Sostituisce: ABS1513

Altre note

Vincitore del CiteAb Award 2024 per i fornitori che hanno conseguito risultati nella ricerca sul Parkinson

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1