17-10191
Saggio scratch Cell Comb™
Sinonimo/i:
Cell layer wound repair assay
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About This Item
Codice UNSPSC:
12352207
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.84
Prodotti consigliati
Produttore/marchio commerciale
Cell Comb™
Chemicon®
QCM
Livello qualitativo
tecniche
activity assay: suitable
cell based assay: suitable
western blot: suitable
Condizioni di spedizione
ambient
Descrizione generale
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La migrazione cellulare può essere studiata mediante svariati metodi, ma il saggio scratch continua a essere un metodo molto impiegato per via della semplicità dei materiali necessari, dell′allestimento dell'esperimento e della raccolta e interpretazione dei dati (Lian, C., et al., 2007; Cory, G., 2011). Nel saggio scratch si effettua un graffio sulla superficie di un monostrato di cellule confluenti con il puntale di una pipetta, creando uno stretto spazio vuoto, assimilabile a una ferita. Subito dopo, le cellule ai margini della ferita attivano un programma per migrare nello spazio vuoto, un processo che continua finché lo spazio non è stato completamente ripopolato di cellule. Il grado di chiusura della ferita è osservabile al microscopio ottico, mentre i pattern di espressione proteica attivati durante il processo di guarigione della ferita sono caratterizzabili mediante immunofluorescenza.
I progressi nella comprensione dei meccanismi che intervengono nel processo di riparazione dei monostrati cellulari feriti sono stati facilitati dallo sviluppo di metodi per eseguire il saggio in piastre multipozzetto. Tali metodi includono la produzione di ferite in monostrati già presenti nei pozzetti o l′occlusione del centro del pozzetto durante la formazione del monostrato per creare uno spazio vuoto (Yarrow, J.C., et al., 2004; Simpson K.J., et al., 2008; Gough, W., et al., 2011). In entrambi i casi, il passo successivo consiste nel quantificare l′entità della migrazione cellulare nello spazio vuoto.
Tuttavia, questi metodi non consentono di delucidare a livello biochimico gli eventi che mediano la riparazione della ferita. Per esempio, le piccole dimensioni di una ferita indotta con il semplice puntale di una pipetta non forniscono materiale sufficiente e adeguato per l′analisi biochimica. Usare lo stesso tipo di puntale per graffiare un monostrato di cellule in una piastra più grande è una procedura tediosa e soprattutto non riproducibile, oltre al fatto che la percentuale di cellule migranti rispetto a quelle quiescenti sarebbe bassa. Sono stati descritti molti metodi per incrementare la scala del saggio scratch creando più ferite nei monostrati cellulari, ma tutti richiedono strumenti speciali (Turchi, L., et al., 2002; Lauder, H., et al., 1998).
EMD Millipore ha sviluppato il saggio scratch Cell Comb™ per rispondere all′esigenza di uno strumento facile da usare per creare molteplici ferite da graffio. Il sistema Cell Comb<TMSYMBOL></TMSYMBOL> in attesa di brevetto è stato ottimizzato per ottenere un campo con graffi molto ravvicinati, con l′intento di massimizzare l′area dei margini delle ferite lasciando al tempo stesso una quantità sufficiente di cellule non danneggiate in grado di migrare nello spazio vuoto. Questa induzione di ferite molto ravvicinate genera una percentuale elevata di cellule migranti del monostrato in rapporto a quelle quiescenti, che offre sufficiente sensibilità per individuare gli eventi biochimici specificamente in corso nella popolazione delle cellule migranti.
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La migrazione cellulare può essere studiata mediante svariati metodi, ma il saggio scratch continua a essere un metodo molto impiegato per via della semplicità dei materiali necessari, dell′allestimento dell'esperimento e della raccolta e interpretazione dei dati (Lian, C., et al., 2007; Cory, G., 2011). Nel saggio scratch si effettua un graffio sulla superficie di un monostrato di cellule confluenti con il puntale di una pipetta, creando uno stretto spazio vuoto, assimilabile a una ferita. Subito dopo, le cellule ai margini della ferita attivano un programma per migrare nello spazio vuoto, un processo che continua finché lo spazio non è stato completamente ripopolato di cellule. Il grado di chiusura della ferita è osservabile al microscopio ottico, mentre i pattern di espressione proteica attivati durante il processo di guarigione della ferita sono caratterizzabili mediante immunofluorescenza.
I progressi nella comprensione dei meccanismi che intervengono nel processo di riparazione dei monostrati cellulari feriti sono stati facilitati dallo sviluppo di metodi per eseguire il saggio in piastre multipozzetto. Tali metodi includono la produzione di ferite in monostrati già presenti nei pozzetti o l′occlusione del centro del pozzetto durante la formazione del monostrato per creare uno spazio vuoto (Yarrow, J.C., et al., 2004; Simpson K.J., et al., 2008; Gough, W., et al., 2011). In entrambi i casi, il passo successivo consiste nel quantificare l′entità della migrazione cellulare nello spazio vuoto.
Tuttavia, questi metodi non consentono di delucidare a livello biochimico gli eventi che mediano la riparazione della ferita. Per esempio, le piccole dimensioni di una ferita indotta con il semplice puntale di una pipetta non forniscono materiale sufficiente e adeguato per l′analisi biochimica. Usare lo stesso tipo di puntale per graffiare un monostrato di cellule in una piastra più grande è una procedura tediosa e soprattutto non riproducibile, oltre al fatto che la percentuale di cellule migranti rispetto a quelle quiescenti sarebbe bassa. Sono stati descritti molti metodi per incrementare la scala del saggio scratch creando più ferite nei monostrati cellulari, ma tutti richiedono strumenti speciali (Turchi, L., et al., 2002; Lauder, H., et al., 1998).
EMD Millipore ha sviluppato il saggio scratch Cell Comb™ per rispondere all′esigenza di uno strumento facile da usare per creare molteplici ferite da graffio. Il sistema Cell Comb<TMSYMBOL></TMSYMBOL> in attesa di brevetto è stato ottimizzato per ottenere un campo con graffi molto ravvicinati, con l′intento di massimizzare l′area dei margini delle ferite lasciando al tempo stesso una quantità sufficiente di cellule non danneggiate in grado di migrare nello spazio vuoto. Questa induzione di ferite molto ravvicinate genera una percentuale elevata di cellule migranti del monostrato in rapporto a quelle quiescenti, che offre sufficiente sensibilità per individuare gli eventi biochimici specificamente in corso nella popolazione delle cellule migranti.
Applicazioni
Categoria di ricerca
Struttura cellulare
Struttura cellulare
Il saggio scratch Cell Comb è stato ottimizzato per ottenere un campo con graffi molto ravvicinati, con l′intento di massimizzare l′area dei margini delle ferite lasciando al tempo stesso una quantità sufficiente di cellule non danneggiate in grado di migrare nello spazio vuoto.
Il sistema Cell Comb™ in attesa di brevetto di EMD Millipore risponde all′esigenza di uno strumento facile da usare per creare molteplici ferite da graffio. Cell Comb è stato ottimizzato per ottenere un campo con graffi molto ravvicinati, con l′intento di massimizzare l′area dei margini delle ferite lasciando al tempo stesso una quantità sufficiente di cellule non danneggiate in grado di migrare nello spazio vuoto. Questa induzione di ferite molto ravvicinate genera una percentuale elevata di cellule migranti del monostrato in rapporto a quelle quiescenti, che offre sufficiente sensibilità per individuare gli eventi biochimici specificamente in corso nella popolazione delle cellule migranti.
Confezionamento
Materiale sufficiente per eseguire 6 saggi scratch.
Componenti
Pettini: 6 pettini monouso confezionati singolarmente.
Piastre rettangolari per colture cellulari: 6 piastre 86 mm x 128 mm per colture cellulari, confezionate singolarmente.
I pettini e le piastre sono stati esposti a irradiazione con elettroni accelerati per ridurre al minimo la possibilità di contaminazione.
Piastre rettangolari per colture cellulari: 6 piastre 86 mm x 128 mm per colture cellulari, confezionate singolarmente.
I pettini e le piastre sono stati esposti a irradiazione con elettroni accelerati per ridurre al minimo la possibilità di contaminazione.
Stoccaggio e stabilità
Conservare i pettini e le piastre di coltura a temperatura ambiente. Usare entro 1 anno dalla data di ricevimento.
Note legali
CELL COMB is a trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Esclusione di responsabilità
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Codice della classe di stoccaggio
10 - Combustible liquids
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